機能性脂質の創製を目指した油脂生産微生物のメタボリックエンジニアリング

用于产生功能性脂质的产油微生物的代谢工程

基本信息

批准号：
12306006
负责人：
清水昌
金额：
$ 20.23万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

高度不飽和脂肪酸生産菌Mortierella alpina 1S-4を代謝工学的に育種するために必須となる宿主ベクター系の構築を試みた。本年度は相同組み換え時のマーカー遺伝子となるorotidine-5'-phosphate decarboxylase遺伝子を取得するとともに、本菌のウラシル要求性変異株の取得に向け、本菌の胞子をニトロソグアニジン処理し、ピリミジン生合成系の中間物質(オロト酸)のアナログ5'-フルオロオロト酸を含む培地にて生育可能な変異株を取得した。また、M.alpina 1S-4の高度不飽和脂肪酸生合成遺伝子の取得を試み、Δ6不飽和化酵素アイソザイム遺伝子の取得に成功するとともに、Δ12不飽和化酵素活性低下株のΔ12不飽和化酵素遺伝子の取得に成功した。さらに.M.alpina 1S-4の鎖長延長酵素について知見を得るべく、鎖長延長酵素欠損変異株の取得を試み、変異株M1を得た。変異株M1では、16:0から18:0への鎖長延長能の低下により16:0が蓄積し、蓄積した16:0がΔ9不飽和化反応とそれに引き続く鎖長延長反応により16:1ω7を経由して18:1ω7へと変換される一方、一部の16:1ω7はn-7経路を経て18:3ω7(16:1ω7→16:2ω7→18:2ω7→18:3ω7)へ、あるいn-4経路を経て20:4ω(16:1ω7→16:2ω4→16:3ω4→18:3ω4→20:4ω4)へ変換された。一方、最近注目を集めている新規機能性脂肪酸・共役リノール酸をリノール酸の異性化を経て生産する菌株のスクリーニングを行った結果、高活性菌としてLactobacillus plantarum AKU1009a株を見いだした。また、アセチレン脂肪酸であるジヒドロクレペニン酸を生産する菌株として、Shizophillum commune YK5株を見いだした。

我们试图构建一种对高度不饱和脂肪酸的脂肪酸细菌Mortierella alpina 1S-4的代谢工程育种必不可少的宿主矢量系统。今年，我们获得了甲状腺素5'-磷酸脱羧酶基因，该基因是一种用于同源重组的标志物基因，为了获得细菌的尿素需要的突变菌株，我们通过硝基糖苷的酸来治疗细菌的孢子，并获得了一个替代的突变剂，可以在一个中含有一个中等含量，并纳入了一个中等含量，并融合了一个中等含量，其中包括一个中等的中等含量。嘧啶生物合成系统的中间物质（原子酸）。此外，该患者试图获得高度不饱和的脂肪酸生物合成基因，并成功获得了Δ6去饱和酶同工酶基因，并成功地获得了降低Δ12desatylase活性的菌株的Δ12去饱和酶。此外，为了了解.m.Alpina 1s-4的链长延伸酶的了解，我们试图获得缺乏链长延伸酶的突变菌株，并获得了突变菌株M1。在突变菌株中，M1、16：0由于链长的延伸从16：0延伸从16：0到18：0，而累积的16：0通过δ9的降温反应和随后的链长伸展反应转换为18：1Ω7，而大约16：1Ω7通过n-n-7：3Ω77：3Ω77：3Ω77：3Ω7。（16：1Ω7→16：2Ω7→18：2Ω7→18：3Ω7）和或N-4通向20：4Ω（16：1Ω7→16：2Ω4→16：16：3Ω4→18：3Ω4→20：4Ω4）。同时，我们筛选了一种产生新型功能性脂肪酸的菌株，即结合的亚油酸，该菌酸最近通过亚油酸的异构化吸引了人们的注意，并发现了高度活跃的lactobacillus plantarum aku1009a。我们还发现了一种shizophillum cummine YK5的菌株，该菌株产生了乙炔脂肪酸二氢苯甲酸。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

H.Kawashima et al: "Industrial Production of dihomo-γ-linoleic acid by a Δ5 desaturase-defective mutant of a fungus Mortierella alpina IS-4"J.Am.Oil Chem.Soc.. 77(11). 1135-1138 (2000)

H.Kawashima 等人：“通过真菌高山被孢霉 IS-4 的 Δ5 去饱和酶缺陷突变体工业生产二高-γ-亚油酸”J.Am.Oil Chem.Soc. 77(11)。 (2000)

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J.Ogawa et al.: "Conjugated Linoleic acid accumulation via co-hydroxy-12-ocladecaenoic acid during microaerobic transformation of linoleic acid by Lactobacillus acldophilus"Appl.Environ.Microbiol.. 67(3). 1246-1252 (2001)

J.Okawa 等人：“嗜酸乳杆菌微需氧转化亚油酸过程中通过共羟基-12-二十碳烯酸积累共轭亚油酸”Appl.Environ.Microbiol.. 67(3)。

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M.Certik et al.: "Isolation and lipid analysis of subcellular fractions from arachidonic acid producing fungus, Mortierella alpina IS-4"Arch.Microbiol.. (in press). (2001)

M.Certik 等人：“花生四烯酸生产真菌高山被孢霉 IS-4 的亚细胞组分的分离和脂质分析”Arch.Microbiol..（出版中）。

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清水昌: "微生物生産の将来を嘱望する/高分子科学とバイオチクノロジーのキャッチボール"社団法人高分子学会. 18 (2001)

Masaru Shimizu：“展望微生物生产的未来/高分子科学与生物技术之间的Catchball”，高分子科学技术学会18（2001）。

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N.Baba et al.: "A first synthesis of a phosphatidylcholine bearing clocosahexaenic and tetracosahexaenoic acids"J.Chem.Soc.,Perkin Trans.. 1. 221-223 (2001)

N.Baba 等人：“带有二十二碳六烯酸和二十四碳六烯酸的磷脂酰胆碱的首次合成”J.Chem.Soc.，Perkin Trans.. 1. 221-223 (2001)

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DOI：
发表时间：
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影响因子：
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Chen;B.;T.Kayukawa;H.Jiang;A.Monteiro;S.Hoshizaki;Y.Ishikawa;小川順;Sakuradani E.et al.;清水昌;清水昌
通讯作者：
清水昌