糸状菌が大量分泌する脂肪球の膜構成分子の解析と応用

丝状真菌大量分泌脂肪球膜组成分子的分析及应用

基本信息

批准号：
15658024
负责人：
清水昌
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、糸状菌による高度不飽和脂肪酸生産研究の過程で、脂質を大量に菌体外へ分泌する変異株を得ることに成功した。昨年度において、この変異株における脂質分泌生産機構の解明へ向け、分泌される脂肪球膜を構成する分子種の解明を試み、セレブロシド様物質が分泌脂肪球膜の主要極性脂質であり、特異な界面活性機能を担っていることを明らかにした。本年度は、このセレブロシド様物質の構造解析を試みた。脂質分泌性変異株V6株の培養液上清よりBligh-Dyer法にて全脂質画分を抽出した後、シリカゲルカラムクロマトグラフ及び高速液体クロマトグラフを用いて単離精製を行った結果、薄層クロマトグラフ上でウシ由来のセレブロシド標品の移動度に近い3つのスポットが確認され、それぞれサンプル1、サンプル2、サンプル3とした。ガスクロマトグラフ及び質量分析の結果から、サンプル1はステロールにグルコースが結合したステロール配糖体であることが判明した。また、ガスクロマトグラフ、質量分析及び核磁気共鳴解析の結果から、サンプル2はグルコース、炭素数14、15、16の2-ヒドロキシ飽和脂肪酸、炭素数19で、9位にメチル基、4位と8位に二重結合を持つスフィンガジエニン型長鎖塩基から構成されるセレブロシドであると同定された。またガスクロマトグラフ、質量分析及び核磁気共鳴解析の結果、ならびに薄層クロマトグラフ上での移動度の違いから、サンプル3はグルコース、炭素数14、15、16の2-ヒドロキシ飽和脂肪酸、炭素数19で、2つの二重結合と2つの水酸基を持つヒドロキシスフィンガジエニン型長鎖塩基から構成されるセレブロシドであると推定された。

在研究丝状真菌对高度不饱和脂肪酸产生的研究过程中，我们成功获得了一种突变菌株，该突变菌株在细菌外分泌大量脂质。去年，我们试图阐明这种突变株中的脂质分泌生产机制，并试图澄清构成分泌的脂肪球膜的分子物种，表明脑剂样物质是分泌的脂肪球的主要极性脂质，并负责独特的表面活性功能。今年，我们试图分析这种大脑样物质的结构方面。使用Bligh-Dyer方法从脂质分泌突变菌株V6的培养上清液中提取总脂质分数，然后使用硅胶柱色谱和高性能液相色谱分离和纯化。分别在薄层色谱和样品1、2和3上确认了接近牛脑剂制剂迁移率的三个斑点。气相色谱和质谱法表明，样品1是与固醇结合的固醇糖苷。此外，从气相色谱，质谱和核磁共振分析的结果中，样品2被鉴定为由葡萄糖组成的大脑尿素，该葡萄糖是14、15和16碳原子的2-羟基饱和脂肪酸，由甲基组成的位置为9和sphingadeenine-Rongens的甲基和甲基的四个键键和甲基的四个碳原子组成的四个碳原子和甲基的四分之一。此外，从气相色谱，质谱法，核磁共振分析和薄层色谱上的迁移率差异来看，据估计，样品3是一种葡萄糖，由2-羟基饱和脂肪酸组成，具有14、15和16碳原子，以及三个碳含量，且均匀的含量为hydroxy，又是hydroxys和hydroxys，并呈hydroxys和hydroxys和hydroxys和hydroxys phydroxeys和hydroxy，键和两个羟基。