シガトキシンの化学合成とその動的挙動の解明

雪卡毒素的化学合成及其动态行为的阐明

• 批准号: 00J03922
• 负责人: 倉橋 拓也
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes (2002)Nagoya University (2000-2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J03922/
• 关键词: 質量分析; Cu, Zu-SOD; カイコ; 休眠覚醒

シガトキシンのような有機分子の動的な挙動をタンパクとの関連において詳細に検討するには、タンパクを^1H NMRに匹敵する解像度で迅速に解析する手段が必須となる。筆者はMS/MSの測定においても0.1Daの解像度が得られるESI-Q-Tof-MS/MSに着目し、タンパクに結合した小分子等の位置を正確に特定する手法の開発に着手した。本年度はカイコ卵の休眠覚醒に深く関与していると考えられている酵素(TIME-EA4)に着目し、TIME-EA4に結合することで休眠覚醒現象を調節している因子をカイコ卵の中に特定することを試みた。そこで休眠覚醒の初期状態にあるカイコ卵から未変性の状態でTIME-EA4を取り出し、TIME-EA4に結合している金属イオン、有機小分子、ペプチドを探索した。金属イオンに関してはESI-MS及びICP-MSによりTIME-EA4一分子あたり二つの銅イオンと一つの亜鉛イオンを含むことがわかった。さらに昨年度確立した手法を適用することにより、TIME-EA4の活性部位はヒスチジンのイミダゾールを介して銅-亜鉛-銅がつながった特異な構造をとっていることが明らかになった。一方TIME-EA4に結合している因子として有機小分子は見いだされなかったが、結合している可能性のあるペプチドが複数見いだされた。

为了检查有机分子（例如CIGATOXIN）与蛋白质相关的有机分子的动态行为，这种方法可以快速分析与 ^1H NMR相当的分辨率的蛋白质。作者的重点是ESI-Q-TOF-MS/MS，该esi-Q-TOF-MS/MS也获得了MS/MS测量的分辨率，并开始开发一种准确识别与蛋白质结合的小分子等位置的方法。今年，我们专注于一种酶（Time-EA4），该酶被认为与蚕鸡蛋的觉醒深深相关，并试图通过与Time-EA4结合来识别调节蚕鸡蛋中蚕鸡蛋中休眠的因素。因此，从蚕鸡蛋中提取时间-EA4，该状态处于处于休眠状态的最初状态，并搜索与Time-EA4结合的金属离子，小有机分子和肽。关于金属离子，ESI-MS和ICP-MS每个分子的时间-EA4包含两个铜离子和一个锌离子。此外，通过应用去年建立的方法，据透露，时间-EA4的活跃位点具有独特的结构，其中铜 - 锌 - 铜蛋白通过组氨酸咪唑可以连接。另一方面，尽管没有发现与Time-EA4结合的因素，但发现了几种潜在结合的肽。