上皮由来抗菌ペプチドの利用による歯周病原性細菌の感染予防にむけて

使用上皮源性抗菌肽预防牙周病原菌感染

• 批准号: 11877366
• 负责人: 高柴 正悟
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877366/
• 关键词: 歯周病; 抗菌ペプチド; 細菌感染制御; 上皮(細胞); 局所遺伝子導入; 唾液(腺)

ヒト上皮細胞の産生するヒト型ベータデフェンシン-2(HBD-2)には,サイトカインや細菌内毒素の刺激によってその産生が誘導される特徴があるので,感染頻度の高い口腔内において,HBD-2の感染予防治療への応用が期待される。本研究では,HBD-2の発現様態と転写制御因子を解明することを目的とした。歯周病罹患歯肉中にHBD-2のmRNA発現を検出し,そのcDNAをクローニングした。また,同歯肉を用いた組織免疫染色によって歯肉上皮顆粒層にHBD-2を検出した。この遺伝子をテトラサイクリンによって転写活性を制御することができる哺乳動物発現ベクターpTRE-Mycに挿入し,子宮頚部上皮癌細胞にin vitro遺伝子導入を行って,テトラサイクリンを添加することによってHBD-2遺伝子(hbd-2)の転写を制御した。そして,この細胞の溶解液中のHBD-2の産生をELISA法によって確認した。さらに,この細胞溶解液は大腸菌に対して抗菌活性を示すことがわかった。今後は,ラット等を用いたin vivoにおける遺伝子導入において,テトラサイクリンによる制御を試みる必要がある。一方,導入と発現の効率を向上させるために,海外の研究者の協力の下,ウイルス由来の新規発現ベクターにhbd-2を挿入している途中である。また,hbd-2プロモーターをクローニングし,β-ガラクトシダーゼをレポーター遺伝子として有しているpSEAPベクターに挿入した。これを子宮頚部上皮癌細胞に導入し,細菌内毒素刺激下での同細胞の産生するβ-ガラクトシダーゼ活性を測定することによって,hbd-2プロモーター領域中の転写制御領域を特定することを試みた。その結果,転写開始点から352bp上流領域に制御部位が存在することがわかった。今後は,この部に結合する転写制御因子を特定する必要がある。

人类上皮细胞产生的人类β-防御素-2（HBD-2）具有通过细胞因子和细菌内毒素刺激诱导其产生的特性，有望应用于感染预防和治疗。本研究的目的是阐明HBD-2的表达模式和转录调控因子。我们检测了牙周病牙龈中HBD-2的mRNA表达并克隆了其cDNA。此外，通过使用相同牙龈的组织免疫染色，在牙龈上皮的颗粒层中检测到HBD-2。 HBD-2 基因 (hbd -2) 转录受到调节。然后通过 ELISA 证实细胞裂解物中 HBD-2 的产生。此外，发现这种细胞裂解物对大肠杆菌表现出抗菌活性。将来，有必要尝试利用大鼠和其他动物体内的四环素来控制基因转移。同时，为了提高导入和表达的效率，我们正在与海外研究人员合作，将HBD-2插入到源自病毒的新表达载体中。此外，克隆hbd-2启动子并将其插入含有β-半乳糖苷酶作为报告基因的pSEAP载体中。我们试图通过将其引入宫颈上皮癌细胞并测量细菌内毒素刺激下细胞产生的β-半乳糖苷酶活性来鉴定HBD-2启动子区域中的转录控制区域。结果表明，转录起始位点上游352 bp区域存在调控位点。将来，有必要确定与该区域结合的转录调控因子。