シナプス後肥厚部(PSD)構成蛋白質の分子構築とシナプス可塑性における機能解析

构成突触后增厚区（PSD）的蛋白质的分子构建和突触可塑性的功能分析

基本信息

批准号：
11170235
负责人：
立花太郎
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

シナプス後肥厚部(post synaptic density:PSD)特異的モノクローナル抗体を作製し、複数の新規PSD蛋白質のクローニングに成功した。その中の1つ、PSD-Zip45はN末側にEVH1、C末側にロイシンジッパードメインを有していた。細胞内での発現実験などからPSD-Zip45はN末側で代謝型グルタミン酸受容体1型(mGluR)に結合し、ロイシンジッパーを介してmGluRをクラスター形成させることを明らかにした。他の結合蛋白を検索した結果、PSD-Zip45はNMDA受容体アンカー蛋白質や細胞骨格蛋白質など複数の蛋白質に結合することを見いだし、シナプスの分子構築において中心的な役割を果たしている可能性を示した。一方、PSD特異的モノクローナル抗体を用いて別にクローニングした新規蛋白質PSD-Zip70は、全長601アミノ酸、SDS-PAGE上の分子量が70kDaで、C末端側にロイシンジッパーモチーフを有しているが、その他に特徴的な配列は見い出せない。ノーザンブロット解析の結果、PSD-Zip70は神経特異的に発生の初期段階から発現していることが判明した。yeast two-hybrid法を用いて結合因子の探索を行ったところ、複数の蛋白質がPSD-Zip70に結合することが明らかとなった。その中のいくつかはエンドサイトーシス関連蛋白であり、PSD-Zip70はエンドサイトーシスに関わる分子である可能性が示唆された。

制备突触后密度（PSD）特异性单克隆抗体，并成功克隆多种新型的PSD蛋白。其中之一，PSD-ZIP45在N端具有EVH1，并且在C端上具有亮氨酸拉链域。从细胞内表达实验中，可以发现PSD-ZIP45与N末端的代谢谷氨酸受体1型（MGLUR）结合，并通过亮氨酸拉链结合MGLUR簇。搜索其他结合蛋白表明，PSD-ZIP45与多种蛋白结合，包括NMDA受体锚固蛋白和细胞骨架蛋白，表明它在突触分子构建中可能起着核心作用。另一方面，使用PSD特异性单克隆抗体分别克隆的新型蛋白质PSD-ZIP70总长度为601个氨基酸，SDS-PAGE上的分子量为70 kDa，并且在C-Terminus上具有亮氨酸Zipper图案，但没有其他不同的序列。 Northern印迹分析表明，PSD-ZIP70是从发展的早期阶段表达的。当我们使用酵母双杂交方法搜索结合因子时，发现多种蛋白质与PSD-ZIP70结合。其中一些是与内吞作用相关的蛋白质，这表明PSD-ZIP70可能是参与内吞作用的分子。