Tリンパ球におけるS6キナーゼの機能とその制御機構の研究

T淋巴细胞S6激酶的功能及调控机制研究

• 批准号: 11148201
• 负责人: 島 礼
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11148201/
• 关键词: S6キナーゼ; ノックアウトマウス; 免疫抑制薬; カルシニューリン; 活性測定法; アポトーシス; NIPP-1; 二重基質特異性ホスファターゼ

1.S6キナーゼノックアウトマウスの解析:S6K1ノックアウトマウスにおいて,免疫抑制薬ラパマイシン感受性のS6のリン酸化が認められたことから,新規のS6キナーゼ(S6K2)の存在が明らかになった。この遺伝子欠損のフェノタイプを明らかにするためにS6K2欠損マウスを作製した。2.カルシニューリン活性の測定法の確立:免疫抑制薬のターゲットであるカルシニューリンはその酵素活性の不安定さにより細胞抽出液における活性を正確に測定するのは不可能であった。抗酸化剤のアスコルビン酸存在化下で,protein phosphatase inhibitor-1を基質に用いることにより,正確かつ感度よくカルシニューリン活性を測定することが可能になった。3.アポトーシスとセリン/スレオニンホスファターゼ(PP)の関係: PPの阻害剤がT細胞のアポトーシスを誘発することが知られている。阻害剤の誘導体を用いて以下のことが明らかにあった。1)PPの阻害に関わる部位とアポトーシスに関わる部位が別々に存在する。2)C8の酵素にbenzyloxymethy基を持つスピロケタールは強力なアポトーシス誘導作用をもつ。4.内在性のセリン/スレオニンホスファターゼ(PP)阻害タンパク質の解析: PP1阻害蛋白のNIPP-1が,3種類のPPIのアイソタイプとin vivoで結合することが明らかになった。5.新規二重基質特異性ホスファターゼ(DSP)遺伝子の単離と解析: DSPはその構造の類似性からMKPファミリーとCDC25ファミリーの2つが知られているが、その2つのファミリーに属さない新しいタイプのDSP遺伝子を単離した。

1. S6激酶敲除小鼠分析：在S6K1敲除小鼠中，观察到对免疫抑制药物雷帕霉素敏感的S6磷酸化，揭示了一种新型S6激酶（S6K2）的存在。为了阐明该基因缺失的表型，我们生成了 S6K2 缺陷小鼠。 2.建立测定钙调神经磷酸酶活性的方法：由于其酶活性不稳定，因此无法准确测量细胞提取物中的钙调神经磷酸酶的活性，而钙调神经磷酸酶是免疫抑制剂的靶标。通过在抗氧化剂抗坏血酸存在下使用蛋白磷酸酶抑制剂-1 作为底物，可以准确、灵敏地测量钙调神经磷酸酶活性。 3.细胞凋亡与丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PP)的关系：已知PP抑制剂诱导T细胞凋亡。使用抑制剂的衍生物可以清楚地看出： 1) PP抑制和细胞凋亡涉及不同的位点。 2）Spiroketal，其C8酶中带有苄氧基甲基，具有很强的细胞凋亡诱导作用。 4.内源性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PP)抑制蛋白的分析：NIPP-1是一种PP1抑制蛋白，被发现在体内与三种PPI同种型结合。 5. 一种新型双底物特异性磷酸酶（DSP）基因的分离和分析：由于结构相似，DSP已知有两种类型，MKP家族和CDC25家族，但这是一种新类型，不属于这两个家族分离出了DSP基因。

项目成果

Shinya Mitsuhashi: "The spiroketals containing a bezyloxymethl moiety at C8 position showed the most potent apoptosis-inducing activity"Bioorganic & Medicinal Chemistry Letter. 9(14). 2007-2014 (1999)

Shinya Mitsuhashi：“在 C8 位点含有苯甲氧基甲基部分的螺缩酮显示出最有效的细胞凋亡诱导活性”Bioorganic

Sei-Eun Kim: "Increased expression of NIPP-1 mRNA positively correlated with malignanat phenotype in rat hepatomas"International Journal of Oncology. (in press). (2000)

Sei-Eun Kim：“NIPP-1 mRNA 表达增加与大鼠肝癌恶性表型呈正相关”《国际肿瘤学杂志》。

Yoko Imai: "Up-regulation of nuclear PP1α and PP1δ hepatoma cells"International Journal of Oncology. 14(1). 121-126 (1999)

Yoko Imai：“核 PP1α 和 PP1δ 肝癌细胞的上调”《国际肿瘤学杂志》14（1）121-126（1999）。

Kunimi Kikuchi: "The apoptosis-inducing activity of the two protein phsphatase inhibitors, tautomycin and thyrsiferyl 23-acetate, is not due to the inhibition of protein phosphatases PP1 and PP2A"International Journal of Molecular Medicine. 4(4). 395-401

Kunimi Kikuchi：“两种蛋白磷酸酶抑制剂（tautomycin 和 thyrsiferyl 23-acetate）的细胞凋亡诱导活性并不是由于蛋白磷酸酶 PP1 和 PP2A 的抑制”国际分子医学杂志。

Kunimi Kikuchi: "Protein phosphatases and cancer"Current Topics in Biochemical Research. (in press). (2000)

Kunimi Kikuchi：“蛋白质磷酸酶与癌症”当前生化研究主题。