不活化スポロゾイトの免疫による赤内型マラリア原虫に対する防御免疫誘導機構

灭活子孢子免疫诱导抗疟原虫保护性免疫的机制

基本信息

批准号：
11147226
负责人：
由井克之
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11147226/
关键词：
マラリア抗原原虫免疫感染防御

项目摘要

X線照射により不活化したPlasmodium yoelii(P.yoelii)スポロゾイトで繰り返しマウスを免疫することにより、抗マラリア原虫抗血清を作成した。この抗血清を用い、Western blot法で赤内型原虫抗原を解析することにより、複数の抗原を同定した。主要なものは、P.yoelii HSP70、MSP1抗原及び未同定の抗原であった。これらの抗原は、肝細胞期と赤血球期原虫の両者に発現されると考えられる。赤内型P.yoelii のcDNAライブラリーを作成し、P.falciparum HSP70のプローブでスクリーニングすることにより、P.yoelii HSP70のcDNAをクローニングした。また抗血清で同ライブラリーをスクリーニングすることにより、新たなマラリア原虫抗原cDNAをクローニングした。この新抗原cDNAの全塩基配列はまだ決定されていないが、従来同定されていない新しい原虫抗原であることが明らかになっている。MSP1が赤内型と肝細胞期両者に発現されることから、MSP1抗原C末端のEGF様ドメインを含む15kDaペプチド断片とマウスHSP70との組換え融合分子を作成した。他のアジュバントなしでこの融合蛋白で免疫することにより、肝細胞期と赤血球期両者に有効な防御免疫を誘導することに成功した。C57BL/6マウスではスポロゾイト感染後赤内型原虫が全く出現せず、肝細胞期における感染阻止が示された。この防御免疫能は、血中抗MSP1抗体価とは直接の相関がなかった。一方、免疫マウスは赤内型原虫の感染に対しても抵抗性を示した。このことから、MSP1/HSP70融合蛋白ワクチンの免疫により肝細胞型と赤内型両者に有効な防御免疫が誘導されると考えられた。

通过用 X 射线照射灭活的约氏疟原虫 (P. yoelii) 子孢子反复免疫小鼠产生抗疟疾抗血清。使用该抗血清，通过使用蛋白质印迹法分析原生动物抗原来鉴定多种抗原。主要有约氏疟原虫HSP70、MSP1抗原和未鉴定抗原。这些抗原被认为由肝细胞期和红细胞期寄生虫表达。建立了赤内型约氏疟原虫的cDNA文库，并用恶性疟原虫HSP70探针筛选，克隆了约氏疟原虫HSP70的cDNA。此外，通过用抗血清筛选同一文库，克隆了一种新的疟原虫抗原cDNA。虽然这种新抗原cDNA的完整碱基序列尚未确定，但已揭示它是一种此前未曾鉴定过的新的原生动物抗原。由于 MSP1 在红细胞阶段和肝细胞阶段均表达，因此我们在 MSP1 抗原 C 末端含有 EGF 样结构域的 15 kDa 肽片段与小鼠 HSP70 之间创建了重组融合分子。通过使用这种融合蛋白而不使用其他佐剂进行免疫，我们成功地诱导了在肝细胞和红细胞阶段均有效的保护性免疫。在C57BL/6小鼠中，子孢子感染后没有出现红色体内寄生虫，表明感染在肝细胞阶段被抑制。这种保护性免疫与血液抗MSP1抗体滴度没有直接相关性。另一方面，免疫小鼠也表现出对原生动物感染的抵抗力。这表明用MSP1/HSP70融合蛋白疫苗进行免疫可诱导针对肝细胞类型和红细胞类型的有效保护性免疫。