非ストレス負荷ヒト癌細胞におけるCa^<++>依存性ユビキチン化を介する野生型p53の分解とその抑制機構

非应激人类癌细胞中野生型 p53 的降解及其通过 Ca^++ 依赖性泛素化的抑制机制

• 批准号: 11140223
• 负责人: 中島 琢磨
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140223/
• 关键词: p53; ユビキチン; Ca^<++>依存型; Mdm2; UbcH5; ストレス; 癌; E2F

非ストレス負荷ヒト癌細胞では、細胞の増殖を抑制しさらに細胞死を誘導する野生型p53のレベルは主に分解系により抑制されている。p53の分解に関与する内在性因子としてはユビキチンリガーゼ(E3)Mdm2とユビキチン結合酵素(E2)UbcH5を含むユビキチン系、Ca^<++>依存性蛋白分解酵素カルパインが報告されている。しかしMdm2、UbcH5はそれぞれp53誘導性およびストレス誘導性で、非ストレス負荷細胞では発現レベルが極めて低く、カルパインはストレスの負荷に関わらず活性が低い。これに対し我々が先に報告したCa^<++>依存性のp53ユビキチン化は非ストレス負荷細胞で著しく強い。従って非ストレス負荷細胞ではCa^<++>依存性ユビキチン系が野生型p53の主要な分解系と推定される。本年度はこのユビキチン系酵素群の検索、当該ユビキチン系の活性を抑制する機構の検索を行い、以下の諸点を明らかにした。1.p53欠失ヒト培養細胞(Saos-2株)抽出液中の野生型p53に対するCa^<++>依存性ユビキチン化の活性は、野生型p53発現細胞(KB株)に比べ極めて微弱である。2.細胞抽出液中での野生型p53のユビキチン化は、細胞へのストレス負荷に関わらずユビキチン結合酵素UbcH5の添加によって促進される。3.ユビキチンリガーゼの内SCF、VCB-like両複合体ファミリーは野生型p53のCa^<++>依存性ユビキチン化に関与する可能性は低いと推定される。4.p53のCa^<++>依存性ユビキチン化が、Ca^<++>依存性に起こるp53の脱リン酸化とユビキチン化という2段階に分離するかどうか検討したが、現時点では分離できることを示唆する結果は得られていない。5.p14^<ARF>の発現誘導に関与すると推定されるE2F1、および新規HLH型E2F1結合因子E2FBP1の高発現はCa^<++>依存性p53ユビキチン化を相加的に抑制する。

在未受应激的人类癌细胞中，抑制细胞增殖并诱导细胞死亡的野生型p53的水平主要受到降解系统的抑制。据报道，包括泛素连接酶(E3)Mdm2和泛素缀合酶(E2)UbcH5的泛素系统和Ca ++ 依赖性蛋白水解酶钙蛋白酶参与p53的降解。然而，Mdm2和UbcH5分别是p53诱导的和应激诱导的，它们在非应激细胞中的表达水平极低，并且无论应激负荷如何，钙蛋白酶的活性都很低。相比之下，我们之前报道的Ca^++依赖性p53泛素化在非应激细胞中明显更强。因此，在非应激细胞中，Ca ++ 依赖性泛素系统被推测为野生型p53的主要降解系统。今年，我们对这个泛素酶群以及抑制泛素系统活性的机制进行了研究，并阐明了以下几点。 1.p53缺陷型人培养细胞(Saos-2株)提取物中野生型p53的Ca^++依赖性泛素化活性与表达野生型p53的细胞(KB株)相比极其弱。是。 2. 无论细胞应激如何，添加泛素结合酶 UbcH5 都会促进细胞提取物中野生型 p53 的泛素化。 3.估计泛素连接酶的SCF和VCB样复合体家族不太可能参与野生型p53的Ca^++依赖性泛素化。 4.我们研究了p53的Ca^++依赖性泛素化是否可以分为Ca^++依赖性p53去磷酸化和泛素化两个步骤，但目前是否可以将它们分开还没有结果。获得建议。 5.E2F1的高表达（推测E2F1参与诱导p14^<ARF>表达）和E2FBP1（一种新型HLH型E2F1结合因子）额外抑制Ca^++依赖性p53泛素化。

项目成果

Takeuchi, A., et al.: "Enhancer and silencer binding proteins involved in the rat cdc2 promoter activation at the G1/S boundary"Genes to Cells. 4. 229-242 (1999)

Takeuchi, A. 等人：“增强子和沉默子结合蛋白参与大鼠 cdc2 启动子在 G1/S 边界的激活”《基因到细胞》。

Ohi, N., et al.: "A novel adenovirus E1B19K-binding protein B5 inhibits apoptosis induced by Nip3 by forming a heterodimer through the C-terminal hydrophobic region"Cell Death & Differentiation. 6. 314-325 (1999)

Ohi, N. 等人：“一种新型腺病毒 E1B19K 结合蛋白 B5 通过 C 端疏水区形成异二聚体来抑制 Nip3 诱导的细胞凋亡”细胞死亡

Shirasuna, K., et al.: "The G10BP-1 gene encoding GC box binding protein, is a target of Myc and Jun/Fos"Genes to Cells. 4. 277-289 (1999)

Shirasuna, K. 等人：“编码 GC 盒结合蛋白的 G10BP-1 基因是 Myc 和 Jun/Fos”基因对细胞的靶标。

Tsunoda, H., et al.: "Effect of wild-type and mutated p53 and Id proteins on the induction of apoptosis by adenovirus E1A, c-myc, bax, and nip3 in p53 null mouse cerebellum cells"Biochem. Biophys. Res. Commum.. 255. 722-730 (1999)

Tsunoda, H. 等人：“野生型和突变型 p53 和 Id 蛋白对腺病毒 E1A、c-myc、bax 和 nip3 在 p53 缺失小鼠小脑细胞中诱导细胞凋亡的影响”Biochem。

Yageta, M., et al.: "The adenovirus E1A domains required for induction of DNA replication in G2/M arrested cells coincide with those required for apoptosis"Oncogene. 18. 4767-4776 (1999)

Yageta, M., 等人：“在 G2/M 停滞细胞中诱导 DNA 复制所需的腺病毒 E1A 结构域与细胞凋亡所需的结构域一致”。