肝臓幹様細胞の分化能を利用した肝癌のex vivo遺伝子治療

利用肝干样细胞的分化潜力进行肝癌离体基因治疗

基本信息

批准号：
11140210
负责人：
寺田邦彦
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140210/
关键词：
肝癌肝臓幹様細胞 ex vivo遺伝子治療細胞移植肝再生

项目摘要

[目的]当教室では、LECラットの肝臓から卵形細胞(oval cell)を分離することに成功し、この未分化な卵形細胞を正常肝臓に移植すると、肝細胞に分化することを見出した。そこで本研究では、肝臓幹様細胞(stem-like cell)の1つと考えられるこの卵形細胞に特定の遺伝子を導入した後、ex vivoに肝癌の肝臓に細胞移植し、遺伝子導入した卵形細胞が正常な肝細胞に分化することにより、肝癌で失われた肝臓機能の再生を図ることを目的とした。肝臓幹様細胞の分化能を利用した肝臓指向性遺伝子デリバリーシステムの開発を目指した。[研究成果]LECラットの肝臓から卵形細胞(oval cell)を分離するのと同様に、健常ラットからパーコール密度勾配遠心法を用いて肝臓幹様細胞と思われる未分化な細胞の分離・培養に成功した。この細胞は、α-フェトプロテインが陽性で、成熟肝細胞のマーカーであるアルブミン、トランスフェリン、α1-アンチトリプシンは陰性であった。また、この細胞にGFP遺伝子を導入することによって、GFPを安定的に発現している細胞株を得ることができた。GFP標識された細胞(5×10^6個)を50%肝切除後のラット肝臓あるいは脾臓に直接移植することによって、in vivoにおけるこの細胞の増殖能あるいは分化能を検討し、肝機能の再生を図ったが、細胞の生着が認められず期待された結果を得ることができなかった。移植した幹様細胞が生着しなかった理由として、細胞を調製する際にトリプシンを用いて完全に分散させたものを注入したために肝臓内に生着することができなかったことが考えられた。そこで現在、この幹様細胞を、ゲル状あるいはシート状にしたI型コラーゲンとともに培養することによって移植に適した形態に加工し、肝臓内に生着し易くすることを試みている。

[目的]在这个教室中，我们成功地将卵形细胞（椭圆形细胞）与LEC大鼠的肝脏分开，发现如果将这种未分化的卵形细胞移植到正常的肝脏中，它将分为肝细胞中。因此，在这项研究中，在此卵形细胞中引入了一个特定基因后，该基因被认为是肝脏树干细胞之一（类似干细胞），在肝癌的肝癌和卵子中引入了肝脏树干细胞之一（类似干细胞），而卵子细胞则被视为卵形细胞。形状的细胞引入了基因。我们的目的是使用肝干细胞的分化来开发面向肝的基因递送系统。 [研究结果]以及卵细胞（椭圆形细胞）与LEC大鼠的肝脏，未实现的细胞的分离和培养，这些细胞被认为是健康大鼠的寄生虫密度。这些细胞呈α-FET蛋白，白蛋白，透明氨酸和α1-抗替我们（成熟的肝细胞标记物）为阴性。另外，通过将GFP基因引入细胞中，获得了稳定表达GFP的细胞库存。 GFP签名的细胞（5x16）在50％后直接检查到大鼠肝脏或脾脏中，以检查该细胞在体内的生长和分化，但是肝功能再生。移植的树干细胞没有生存的原因是，它们无法在肝脏中佩戴，因为它们在制备细胞时使用胰蛋白酶完全分散。目前，我们正在尝试使用凝胶或类似胶原的胶原蛋白处理此树干细胞，以使其更容易在肝脏中佩戴。