骨髄からの肝幹細胞の分離と小児代謝性肝疾患に対する細胞移植治療

骨髓肝干细胞分离及细胞移植治疗小儿代谢性肝病

基本信息

批准号：
15591082
负责人：
寺田邦彦
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]肝移植に代わる治療法として細胞移植治療が考慮されている。最近、骨髄細胞中に肝細胞に分化できる幹細胞が存在することが報告されているが、肝細胞に分化可能な骨髄細胞の数は非常に少なく、このような細胞を分離するには大規模な設備が必要である。そこで、本研究では以下の二つを目的とした。(1)申請者らがこれまでに確立してきた肝臓から肝幹細胞を分離する方法を発展させ、骨髄細胞より多分化能を保持した肝幹細胞を効果的に分離できる方法を開発する。(2)分離した肝幹細胞が短期間で増殖できる条件を見つけだし、さらに組織工学的手法を応用して移植に適した状態に加工し、小児代謝性肝疾患に対して充分な治療効果が期待できる幹細胞移植法を確立する。昨年度の研究から、骨髄細胞中にはアルブミンを発現する肝細胞の性質を持った細胞に分化可能な細胞が存在し、これをin vitroで培養できることがわかった。今年度はさらに、肝細胞以外の肝臓構成細胞に分化できる細胞が骨髄中に存在するか否かを検討した。[方法]健常ラット大腿骨より骨髄細胞を採取後、パーコール密度勾配遠心法を用いて、比重1.077より軽い分画中の細胞を分離した。得られた細胞を単独であるいは肝星細胞と共培養した。タンパク発現を免疫染色法、ウェスタンブロット法で検討した。[結果]肝類洞内皮細胞を特異的に認識するSE-1抗体で分離した骨髄細胞を染色したところ、少数の有核細胞が染色された。さらに、肝星細胞と共培養したところ、その数は培養日数(最長3週間)の経過とともに増加した。骨髄細胞におけるSE-1抗原の発現増加はウェスタンブロット法でも確認できた。[結論]本研究において、骨髄細胞中には肝細胞のみならず肝類洞内皮細胞の前駆細胞も存在していることが示唆された。今回用いた分離法によって、骨髄から肝臓の前駆細胞が得られることが明らかとなり、細胞移植の細胞源として骨髄が有用であることが示された。

[目的] 细胞移植疗法被认为是肝移植的替代疗法。最近有报道称，骨髓细胞中存在可以分化为肝细胞的干细胞，但能够分化为肝细胞的骨髓细胞数量很少，分离此类细胞需要大规模的研究设备。必需的。因此，本研究有以下两个目的。 (1)通过开发申请人迄今为止建立的从肝脏分离肝干细胞的方法，开发一种能够有效地从骨髓细胞分离保留多能性的肝干细胞的方法。（2）通过寻找使分离的肝干细胞在短时间内增殖的条件，并应用组织工程技术将其加工成适合移植的状态，我们可以期待对小儿代谢性肝病有足够的治疗效果。建立干细胞移植方法。去年的研究表明，骨髓中有一些细胞可以分化为表达白蛋白的肝细胞，并且这些细胞可以在体外培养。今年，我们进一步研究了骨髓中是否存在可以分化为肝细胞以外的肝脏构成细胞的细胞。 [方法]从健康大鼠股骨中采集骨髓细胞后，采用Percoll密度梯度离心分离比重小于1.077的部分的细胞。将获得的细胞单独培养或与肝星状细胞共培养。通过免疫染色和蛋白质印迹检查蛋白质表达。 [结果]当用特异性识别肝窦内皮细胞的SE-1抗体对分离的骨髓细胞进行染色时，少量有核细胞被染色。此外，当与肝星状细胞共培养时，数量随着培养天数的推移（最多3周）而增加。 Western blotting也证实了骨髓细胞中SE-1抗原表达的增加。 [结论]本研究提示骨髓细胞中不仅存在肝细胞，还存在肝窦内皮细胞的前体细胞。本研究中使用的分离方法表明可以从骨髓中获得肝祖细胞，表明骨髓可用作细胞移植的细胞来源。