口腔扁平上皮癌細胞におけるnm23遺伝子の分化誘導抑制効果とその制御

nm23基因对口腔鳞癌细胞分化诱导的抑制作用及其调控

基本信息

批准号：
10877326
负责人：
佐藤光信
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877326/
关键词：
nm23遺伝子口腔扁平上皮癌細胞分化誘導抑制効果

项目摘要

我々の教室で分離・樹立したヒト口腔扁平上皮癌細胞BHYは、ヌードマウスに移植すると、高度分化型扁平上皮癌を形成する。一方、ヒト口腔扁平上皮癌細胞HNは未分化型扁平上皮癌細胞を形成する。1.HN細胞では、nm23-H1及びnm23-H2遺伝子とも、mRNAが高度に発現していることを、一方BHY細胞ではそれぞれの遺伝子の発現量の低いことを、Northern blotting及び半定量RT-RCR法により明らかにした。更に、タンパクレベルでも同様の所見をimmunoblotting及び免疫染色法(ABC)により検出した。2.BHY,HN細胞にnm23-H1あるいはnm23-H2遺伝子に対するアンチセンス・オリゴヌクレオチドを導入したBHY,HN細胞において、TPAに応答してインボルクリン、フラゲリンあるいはサイトケラチンK1遺伝子が高度に発現してくることをABC法、蛍光抗体法あるいはNorthern blottingにより検出した。すなわち、nm23-H2遺伝子は分化抑制機能を保有していることを示唆する実験結果を得た。3.nm23-H2cDNAをSRαプロモーターにアンチセンス・オリエントに連結した発現ベクターをBHY,HN細胞にリポフェクチン法により導入した。このtransfectantsをTPAにてin vitroで処理した後、ヌードマウスに移植して、腫瘍増殖と腫瘍分化度につき検索した。その結果、有意な腫瘍の増殖抑制とkeratinocyte differentiationの出現を検出した。

在我们的教室中分离和建立的人口腔鳞状细胞癌细胞将移植到裸鼠中时形成高度分化的鳞状细胞癌。另一方面，人口服鳞状细胞癌细胞HN形成未分化的鳞状细胞癌细胞。 1。在HN细胞中，mRNA在NM23-H1和NM23-H2基因中都高度表达，而在BHY细胞中，通过Northern blotting和半定量RT-RCR方法揭示了每个基因的表达水平。此外，通过免疫印迹和免疫染色（ABC）在蛋白质水平上检测到了类似的发现。 2。在BHY中，将反义寡核苷酸与NM23-H1或NM23-H2基因引入BHY和HN细胞中，ABC，Immunofluororesence或Northernern blottting to tpa响应TPA，将高度表达的incocrin，flagellin或cytokeratin K1基因引入Bhy和HN细胞中。换句话说，实验结果表明NM23-H2基因具有抑制分化的功能。 3。通过Lipofectin方法将NM23-H2 cDNA连接到反义东方的SRα启动子与反义东方的表达载体。使用TPA在体外处理这些转染剂，然后植入裸鼠，并寻找肿瘤生长和肿瘤分化。结果，检测到显着的肿瘤生长抑制和角质形成细胞分化的出现。