新機能抗体-受容体キメラ蛋白質の創製と細胞増殖制御機構解析への応用

新型功能性抗体-受体嵌合蛋白的构建及其在细胞增殖调控机制分析中的应用

基本信息

批准号：
10179202
负责人：
熊谷泉
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者らが展開してきた、抗ニワトリリゾチーム抗体HyHEL10可変領域(Fv,VHとVLからなる)と抗原の相互作用の精密解析、抗原認識能の変換や抗原抗体複合体の構造解析研究と、二量体形成により活性化されるマウスエリスロポエチン受容体とHyHEL10を融合させたキメラ受容体を用いた、細胞増殖の人工的制御技術の開発研究を踏まえ、本研究では(1)HyHEL10Fv-キメラ受容体を用いた抗体分子認識能と細胞増殖制御の解析、(2)HyHEL10の分子認識能の変換による任意のリガンド分子による細胞増殖制御系の構築を目標とし、本年度は研究推進の基盤として、以下の研究を遂行した。(1)Fv断片の結晶構造解析:HyHEL10野生型及び部位特異的変異導入を施した抗体Fv断片と抗原の複合体について、結晶構造解析を行った。野生型Fvについては、Fabと異なる分子機構で、抗原を認識している可能性が示唆された。塩橋に関与するアミノ酸残基に変異を導入した抗体(32A,96A〉と抗原の複合体については、変異導入の効果が、構造変化による場合(32A)と水分子の導入による場合(96A)が観察された。(2)キメラ受容体:変異を導入した抗体を融合させた受容体蛋白質の大腸菌を用いた発現系の構築を目指した。融合させる、機能変換を施した抗体断片の抗原認識能を詳細に解析し、Fv断片と一本鎖化したscFvの間に認識能の相違が観察された。

Based on the efforts developed by the researchers, the study of precise analysis of the interaction between the anti-chicken lysozyme antibody HyHEL10 variable region (comprised by Fv, VH and VL) and antigen, the investigation into structural analysis of antigen-antibody complexes, and the development of artificial control techniques for cell proliferation using chimeric receptors that fuse mouse erythropoietin receptors activated by dimer形成和HYHEL10，该研究针对（1）使用Hyhel10FV-核受体分析抗体分子识别能力和细胞增殖，以及（2）使用任何配体分子通过任何配体分子来构建细胞增殖控制系统，通过转换Hyhel10的分子识别能力。今年，以下研究是促进研究的基础。（1）FV片段的晶体结构分析：对经历了位置定向诱变的抗体FV片段和抗原的复合物进行了晶体结构分析。有人提出，野生型FV可以通过不同于FAB的分子机制识别抗原。对于抗体（32a，96a）与抗原引入的抗原的复合物，与盐桥涉及的氨基酸残基处的突变相关，当诱变的作用是由于结构变化（32a）以及水分子的引入（96a）时，观察到诱变的作用。（2）嵌合受体：我们旨在使用大肠杆菌构建与诱变融合的受体蛋白的表达系统。我们详细分析了与功能转换为融合的抗体片段的抗原识别能力，并且在FV片段和单链SCFV之间观察到了识别能力的差异。