EGFR陽性がんの標的治療を目指す低分子抗体の創製

创建用于靶向治疗 EGFR 阳性癌症的小分子抗体

基本信息

批准号：
20015004
负责人：
熊谷泉
金额：
$ 7.04万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト型化抗EGFR抗体528は可変領域(Fv)のみを用いて作製した低分子二価抗体が単独で、がん細胞成長抑制効果を示すことも確認している他、X線結晶構造解析に基づく考察により、親和性の向上にも成功している。本研究は、このヒト型化528Fvを用いて、さらなる高親和性クローンの取得、多価化、高機能性フォーマットの開発の観点から研究を進め、EGFR陽性がん腫を標的とする新規低分子抗体の創製を目指している。本年度の研究成果は以下の通りである。1、高親和性クローンの取得:前年度得られた高親和性クローンと構築した多価化528一本鎖抗体(scFv)を組み合わせて、機能評価を行ったところ、がん細胞増殖抑制効果の向上が確認された。また、更なる変異等の微調整を行うための高親和性クローンの新規選択手法も確立した。2、多価化分子の開発:前年度構築した多価化528scFvの詳細な機能解析を進め、生産性、安定性、体内動態等の観点から至滴な分子を選定した。この分子がin vitro、およびin vivoにおいても市販の抗EGFR抗体に匹敵する効果を示すことを確認した他、生産量の向上に向けても取り組み、大腸菌の沈殿画分からも機能的な可溶性分子が調製可能であることを示した。3、高機能性フォーマットの開発:リンカーの改変による多量体化に加えて、自己集合ペプチドを用いるなど様々な観点から高機能性フォーマットの開発を進めた。特に、リジン残基を活性に影響を与えない残基に変異させた分子は、均一なポリエチレングリコール付加(PEG化)を可能とし、さらには架橋剤を用いることで、新たな多価の高機能性フォーマットを創出した。以上のように、EGFR陽性がん治療薬を目指す複数の低分子抗体の創製に成功し、本提案を総括した。

人源化抗EGFR抗体528已被证实是仅使用可变区（Fv）制备的低分子量二价抗体，具有癌细胞生长抑制作用，并且在X射线晶体结构中也被证明有效基于这些考虑，我们也成功地提高了兼容性。在本研究中，我们将利用这种人源化528Fv从获得进一步的高亲和力克隆、多价性和开发高功能形式的角度推进研究，并开发针对EGFR阳性癌症的新型小分子。来产生抗体。今年的研究成果如下。 1.高亲和力克隆的获得：通过将前一年获得的高亲和力克隆与构建的多价528单链抗体(scFv)相结合进行功能评价，确认了功能的改善。我们还建立了一种选择高亲和力克隆以进一步微调突变的新方法。 2.多价分子的开发：我们对前一年构建的多价528scFv进行了详细的功能分析，从生产率、稳定性、药代动力学等角度选择了最合适的分子。除了确认该分子在体外和体内表现出与市售抗EGFR抗体相当的效果外，我们还致力于提高产量，并且还从大肠杆菌的沉淀部分中获得了功能性可溶性分子。事实证明它是可以准备的。 3.高功能形式的开发：除了通过修饰连接体进行多聚化之外，我们还从各种角度进行高功能形式的开发，包括使用自组装肽。特别是，赖氨酸残基突变为不影响活性的残基的分子能够均匀添加聚乙二醇（聚乙二醇化），此外，通过使用交联剂，可以创建新的多价和高功能性分子。。如上所述，我们已经成功地创造了多种旨在成为 EGFR 阳性癌症治疗剂的低分子量抗体，并总结了这一提议。