新規抗リンパ腫治療薬を目指した多機能性融合抗体の開発研究

针对新型抗淋巴瘤疗法的多功能融合抗体的研究和开发

基本信息

批准号：
06F06410
负责人：
熊谷泉
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

がん細胞はT細胞が標的とするMHCの発現を低下させるなど、その攻撃から免れている。このため、T細胞をがん細胞に標的化したり、がん細胞特異的な殺傷能を有する新規治療薬の開発は望まれている。そこで、本研究は、MHCとリンパ腫上に高発現しているCD19等に対する一本鎖抗体(scFv)との融合分子、あるいは、がん細胞にのみ強力なアポトーシスを誘導するTRAILを遺伝子工学的に融合した抗体の構築を目指す。さらには、これらを組み合わせた融合タンパク質の構築も試みるなど、Bリンパ腫を中心とする悪性腫瘍に対する多機能性融合抗体の開発を目的としている。本年度の研究成果は以下の通りである。TRAIL単独分子は、大腸菌不溶性画分から段階透析法を用いた巻き戻しによる調製では、活性の低下が見られるが、昨年度、DDTによる還元処理と亜鉛の添加により、活性を回復させることに成功した。本年度は、高機能性TRAIL分子の創製を目指した多量体化を行った。まず、市販のTRAIL分子のビオチン化を行い、ストレプトアビジンを介して四量体化させ、がん細胞の成長阻害試験により、機能の低下等がないことを確認した。続いて、ビオチン化配列を導入した組換えTRAIL(bio-TRAIL)の発現ベクターを構築し、構築した巻き戻し法を用いて、bio-TRAILを調製後、同様にストレプトアビジンを介して四量体化させ機能評価を行った。結果、市販のTRAIL抗体と同様に機能が低下しないことを確認した。また同様に昨年度、調製に成功した抗EGFR抗体528一本鎖抗体(scFv)とTRAILの融合タンパク質の、治療分子としての可能性をさらに高めるための、ヒト型化したscFvとの置換、およびBリンパ腫に対しての適用を見据えた抗CD19抗体の利用に関する技術基盤を確立した。

癌细胞免于攻击，例如减少T细胞靶向的MHC的表达。因此，希望将T细胞靶向癌细胞，并发展具有癌细胞特异性杀伤潜力的新的治疗剂。因此，这项研究旨在构建一种将MHC与CD19等的单链抗体（SCFV）结合在一起的分子，该抗体在淋巴瘤上高度表达，或者是在基因工程上融合进行融合的抗体，该抗体仅在癌细胞中诱导强烈的凋亡。此外，该公司旨在通过试图构造将它们结合的融合蛋白来开发针对恶性肿瘤（主要是B淋巴瘤）的多功能融合抗体。今年的研究结果如下：TRAIL单分子通过使用阶段透析来放松，从大肠杆菌不稳定的部分制备时，活动的活性降低，但是去年，通过减少DDT处理和添加Zinc的治疗方法成功地恢复了活性。今年，我们实施了多聚化，目的是创建高度功能性的跟踪分子。首先，一种可商购的TRAIL分子是生物素化的，并通过链霉亲和素化四聚体，而癌细胞生长抑制测试证实了功能没有下降。随后，构建了重组轨迹（Bio-Trail）表达载体以引入生物素化序列，并使用构造的放松方法制备生物trail，并通过链霉亲素进行类似的四聚体来评估功能。结果，已经证实该函数不会恶化，类似于市售的跟踪抗体的功能。同样，去年，我们为替换步道的融合蛋白，人性化的SCFV和人源化的SCFV和使用抗CD19抗体建立了技术基础，目的是进一步提高抗cd19抗体的潜力，以进一步提高潜在的治疗分子，以进一步增强抗cd19抗体的潜力。