新規抗リンパ腫治療薬を目指した多機能性融合抗体の開発研究

针对新型抗淋巴瘤疗法的多功能融合抗体的研究和开发

基本信息

批准号：
06F06410
负责人：
熊谷泉
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

がん細胞はT細胞が標的とするMHCの発現を低下させるなど、その攻撃から免れている。このため、T細胞をがん細胞に標的化したり、がん細胞特異的な殺傷能を有する新規治療薬の開発は望まれている。そこで、本研究は、MHCとリンパ腫上に高発現しているCD19等に対する一本鎖抗体(scFv)との融合分子、あるいは、がん細胞にのみ強力なアポトーシスを誘導するTRAILを遺伝子工学的に融合した抗体の構築を目指す。さらには、これらを組み合わせた融合タンパク質の構築も試みるなど、Bリンパ腫を中心とする悪性腫瘍に対する多機能性融合抗体の開発を目的としている。本年度の研究成果は以下の通りである。TRAIL単独分子は、大腸菌不溶性画分から段階透析法を用いた巻き戻しによる調製では、活性の低下が見られるが、昨年度、DDTによる還元処理と亜鉛の添加により、活性を回復させることに成功した。本年度は、高機能性TRAIL分子の創製を目指した多量体化を行った。まず、市販のTRAIL分子のビオチン化を行い、ストレプトアビジンを介して四量体化させ、がん細胞の成長阻害試験により、機能の低下等がないことを確認した。続いて、ビオチン化配列を導入した組換えTRAIL(bio-TRAIL)の発現ベクターを構築し、構築した巻き戻し法を用いて、bio-TRAILを調製後、同様にストレプトアビジンを介して四量体化させ機能評価を行った。結果、市販のTRAIL抗体と同様に機能が低下しないことを確認した。また同様に昨年度、調製に成功した抗EGFR抗体528一本鎖抗体(scFv)とTRAILの融合タンパク質の、治療分子としての可能性をさらに高めるための、ヒト型化したscFvとの置換、およびBリンパ腫に対しての適用を見据えた抗CD19抗体の利用に関する技術基盤を確立した。

癌细胞能够通过减少 T 细胞靶向的 MHC 表达来逃避这种攻击。因此，需要开发新的治疗剂，将T细胞靶向癌细胞并具有特异性杀死癌细胞的能力。因此，本研究旨在开发MHC和针对淋巴瘤高表达的CD19等的单链抗体（scFv）之间的融合分子，或者针对仅在癌细胞中诱导强烈凋亡的TRAIL进行基因改造。构建融合抗体。此外，我们还尝试构建将这些结合的融合蛋白，旨在开发针对恶性肿瘤（主要是B淋巴瘤）的多功能融合抗体。今年的研究成果如下。当使用逐步透析法从大肠杆菌不溶级分中解旋制备TRAIL单分子时，观察到活性下降，但去年我们通过DDT还原处理和添加锌成功恢复了活性。今年，我们进行了多聚化，旨在创造高功能的 TRAIL 分子。首先，将市售的TRAIL分子通过链霉亲和素进行生物素化和四聚化，癌细胞生长抑制测试证实没有功能丧失。接下来，构建导入了生物素化序列的重组TRAIL的表达载体(bio-TRAIL)，并使用构建的解旋方法制备bio-TRAIL，然后使用链霉亲和素进行四聚化。其结果，确认了其功能并未像市售的TRAIL抗体那样降低。同样，为了进一步增加去年成功制备的抗EGFR抗体528单链抗体（scFv）和TRAIL融合蛋白作为治疗分子的潜力，我们将其替换为人源化scFv，并且B我们为抗 CD19 抗体的使用奠定了技术基础，着眼于淋巴瘤的应用。