新規代謝阻害剤によるセラミドのアポトーシス情報の可視化

使用新型代谢抑制剂可视化神经酰胺凋亡信息

基本信息

批准号：
10178206
负责人：
岡崎俊朗
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10178206/
关键词：
ヒラミドアポトーシス

项目摘要

我々の実験データーでは、多剤耐性化を示すHL-60細胞でベースラインのGluCerT、SM合成酵素、セラミダーゼ活性が親株の薬剤感受性細胞より約2-5倍程度に増加していた。この多剤耐性白血病細胞HL-60/adrを用いたセラミド代謝酵素系の多剤耐性機構への関与を示す実験結果を紹介する。ダウノマイシン3μM(感受性細胞は24時間後にほとんど生存しない濃度)処理後にアポトーシスによる細胞死は誘導されないが、GluCerT活性の阻害剤であるPMMPやSM合成酵素の阻害剤であるMS209(同時に、mdrポンプの阻害剤でもある)を単独では細胞死を誘導しない濃度で同時に処理すると、GluCerT活性やSM合成酵素活性が抑制され、その結果細胞内セラミド量が増加し多剤耐性細胞にアポトーシスを誘導し得ることが明かとなった。このことは、ダウノマイシンにより増加されたセラミドがGluCerT、SM合成酵素、セラミダーゼ活性の増強により素早く代謝除去され細胞がアポトーシスから免れる機構を各々の酵素の阻害剤を処理することで破綻させ、細胞内セラミド量増加によるアポトーシスシグナルを活性化することにより多剤耐性化が克服できる可能性を強く示唆している。すなわち、糖鎖もしくはフォスフォリルコリンの修飾により細胞内セラミド量が増減されるステップが細胞の生死の制御機構として重要で、白血病細胞における新たな薬剤耐性機構の一つであり、臨床的見地より見るとグルコシル/ガラクトシルセラミド転移酵素もしくはSM合成酵素などセラミド代謝酵素のより特異的な阻害剤が発見されれば、セラミドシグナルを増強する薬物として効果的であり強力な多剤耐性克服剤となり得ることが期待される。従って、将来は、現在進行している薬剤排出ポンプmdrを用いた遺伝子治療と同様に、たとえば白血病患者より採取したCD34陽性の骨髄幹細胞にグルコシルセラミド転移酵素やSM合成酵素を遺伝子導入することにより薬剤耐性の造血幹細胞を作成し、これらの細胞を生体内に戻すことにより大量化学療法により生ずる造血能抑制を回避すると言うような白血病・悪性リンパ腫の遺伝子治療が可能になるかもしれない。

我们的实验数据表明，在表现出多药耐药性的HL-60细胞中，基线葡萄糖，SM合酶和神经酰胺酶活性在父母菌株的药物敏感细胞中增加了约2-5倍。我们提出了实验结果，显示了使用该多药耐药性白血病细胞HL-60/ADR参与神经酰胺代谢酶系统的参与。 Although cell death due to apoptosis is not induced after treatment with 3 μM daunomycin (a concentration in which sensitive cells rarely survive 24 hours), it was revealed that when PMMP, an inhibitor of GluCerT activity, and MS209, an inhibitor of SM synthase (also an inhibitor of mdr pump), is simultaneously treated at a concentration that does not induce cell death alone, GluCerT activity and SM synthase活性被抑制，导致细胞内神经酰胺含量的增加，并且可以在多药耐药细胞中诱导凋亡。 This strongly suggests that the mechanism by which ceramide increased by daunomycin rapidly removes metabolism by enhancing GluCerT, SM synthase, and ceramidase activity, and cells escape apoptosis by treating inhibitors of each enzyme, causing the cells to fail, and the mechanism by which inhibitors of each enzyme can be repelled, and the intracellular ceramide level can be activated to activate凋亡信号通过增加细胞中神经酰胺的量，从而克服多药耐药性。换句话说，通过修饰聚糖或磷酸胆碱来增加或减少细胞内神经酰胺含量的步骤是控制细胞生命和死亡的一种机制，并且是白血病细胞中新型耐药性机制之一。从临床角度来看，如果发现了神经酰胺代谢酶（例如葡萄糖基/半乳糖基酰胺转移酶或SM合酶）的更特异性抑制剂，则可以预期它将作为增强神经酰胺信号的药物有效，并可以成为胜任多种抗耐药性的强大药物。因此，将来，类似于使用药物外排泵MDR进行的基因治疗相似，可以通过将葡萄糖基酰胺瞬变酶和SM合酶转换为CD34阳性骨髓干细胞中从白血病患者中收集的葡萄糖基因疗法，从而导致这些细胞的抑制作用，从而产生了抗药性造血干细胞，从而避免了这些细胞，从而避免了这些细胞，从而避免了这些细胞，从而避免了这些细胞的抑制作用。