血管平滑筋トロポミオシンの発現調節に関与するスプライシング因子の同定

鉴定参与调节血管平滑肌原肌球蛋白表达的剪接因子

• 批准号: 10177228
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10177228/
• 关键词: 血管平滑筋細胞; αトロポミオシン; 形質転換; 細胞周期; 蛋白質リン酸化; Cキナーゼ

血管平滑筋の形質転換に伴うαトロポミオシン・アイソフォーム変換の調節に関与する情報伝達機構を明らかにする事を目的として今年度の研究を行った。1. 平滑筋細胞を培養すると、培養3〜5日目を最大に、一過性に非平滑筋型αトロポミオシンの発現が増加した。非平滑筋型アイソフォームの発現増加に一致して、BrdUの取り込みが、培養3日目を最大に一過性に増加した。2. コンフルエントの細胞を、2日間血清を含まない培地で培養し、再び血清刺激を行うと、刺激1.5時間で、非平滑筋型αトロポミオシンの発現が増加した。血清濃度1%から増強作用が認められ、3%で最大効果に達した。この時、非平滑筋型アイソフォームの発現は刺激前の約2倍に増加した。3. 血清再添加による非平滑筋型アイソフォーム発現増加は、H-7処理により完全に抑制されたが、wortmanninは有意な抑制作用を示さなかった。4. phorbil 12,13 dibutyrateは、血清刺激と同様に、刺激1.5時間で非平滑筋型アイソフォーム発現を増加させた。1nMから増強作用が認められ、100nMで最大効果に達した。この時、非平滑筋型アイソフォームの発現は刺激前の約2倍に増加した。5. Phorb01 12,13 dibutyrateは、1.5時間あるいは24時間刺激を行っても、BrdU取り込みには影響を与えなかった。血清刺激も、1.5時間ではBrdU取り込みを増加させなかったが、24時間刺激を続けると、濃度依存性にBrdU取り込みを増加させた。血管平滑筋細胞は、増殖性増加に伴い、脱分化し、非平滑筋型αトロポミオシンが増加する。この非平滑筋型アイソフォーム増加には、Cキナーゼが関与することが示唆された。Cキナーゼ依存性発現調節は、細胞周期がS期に入る前、おそらく、GO/Gl移行期に生じると考えられた。

今年的研究旨在阐明与血管平滑肌转化相关的α-原肌球蛋白异构体转化调节所涉及的信息转导机制。 1.培养平滑肌细胞时，非平滑肌α-原肌球蛋白的表达在培养第3至5天短暂增加至最大值。与非平滑肌亚型表达增加一致，BrdU 掺入在培养第 3 天短暂增加至最大值。 2.汇合的细胞在无血清培养基中培养2天并再次用血清刺激时，刺激后1.5小时非平滑肌α-原肌球蛋白的表达增加。从1%的血清浓度开始观察到增强作用，并且在3%时达到最大作用。此时，非平滑肌亚型的表达增加大约是刺激前的两倍。 3.由于重新添加血清而导致的非平滑肌亚型表达的增加被H-7处理完全抑制，但渥曼青霉素没有表现出任何显着的抑制作用。 4.Phorbil 12,13 二丁酸酯在刺激 1.5 小时时增加非平滑肌亚型表达，与血清刺激相似。从1nM开始观察到增强效果，在100nM时达到最大效果。此时，非平滑肌亚型的表达增加大约是刺激前的两倍。 5. 即使刺激1.5或24小时后，Phorb01 12,13二丁酸酯对BrdU吸收也没有影响。血清刺激 1.5 小时也不会增加 BrdU 摄取，但持续刺激 24 小时会以浓度依赖性方式增加 BrdU 摄取。血管平滑肌细胞随着增殖的增加而去分化，非平滑肌α-原肌球蛋白增加。有人认为 C 激酶参与了非平滑肌亚型的增加。 C激酶依赖性表达调节被认为发生在细胞周期进入S期之前，可能发生在GO/G1过渡期。

项目成果

Kawasaki J,Hirano K,et al.: "Mechanisms of vasorelaxation induced by troglitazone,a novel anti-diabetics,in the porcine coronary artery." Circulation. 98. 2446-2452 (1998)

Kawasaki J、Hirano K 等人：“新型抗糖尿病药曲格列酮在猪冠状动脉中诱导血管舒张的机制。”

Zhou YB,Nishimura J,Hirano K,et al.: "The exogenously added small subunit of smooth muscle myosin phosphatase increases the Ca^<2+> sensitivity of the contractile apparatus in the permeabilized porcine renal artery." Biochemical and Biophysical Research C

Zhou YB,Nishimura J,Hirano K,et al.：“外源添加的平滑肌肌球蛋白磷酸酶小亚基增加了透化猪肾动脉中收缩装置的 Ca^2 敏感性。”

Yasutsune T,Kawakami N,Hirano K,et al: "Vasorelaxation and inhibition of the voltage-operated Ca^<2+> channel by FK506 in porcine coronary artery." British Journal of Pharmacology. 印刷中. (1999)

Yasutsune T、Kawakami N、Hirano K 等人：“猪冠状动脉中 FK506 的血管舒张和抑制作用”，《英国药理学杂志》出版。

Niiro N,Nishimura J,Hirano K,et al.: "Mechanisms of galanin-induced contraction in the rat myometrium." British Journal of Pharmacology. 124. 1623-1632 (1998)

Niiro N、Nishimura J、Hirano K 等人：“甘丙肽诱导大鼠子宫肌层收缩的机制”。

Zhou YB,Hirano K,et al: "NH_2-terminal fragments of 130 kDa subunit of myosin phosphatase increases Ca^<2+> sensitivity of the porcine renal artery" Journal of Physiology. 印刷中. (1999)

Zhou YB、Hirano K等人：“肌球蛋白磷酸酶130 kDa亚基的NH_2末端片段增加了猪肾动脉的Ca 2+ 敏感性”，《生理学杂志》出版(1999)。