血管平滑筋トロポミオシンの発現調節に関与するスプライシング因子の同定

鉴定参与调节血管平滑肌原肌球蛋白表达的剪接因子

• 批准号: 10177228
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10177228/
• 关键词: 血管平滑筋細胞; αトロポミオシン; 形質転換; 細胞周期; 蛋白質リン酸化; Cキナーゼ; 血管平滑筋細胞; αトロポミオシン; 形質転換; 細胞周期; 蛋白質リン酸化; Cキナーゼ

血管平滑筋の形質転換に伴うαトロポミオシン・アイソフォーム変換の調節に関与する情報伝達機構を明らかにする事を目的として今年度の研究を行った。1. 平滑筋細胞を培養すると、培養3〜5日目を最大に、一過性に非平滑筋型αトロポミオシンの発現が増加した。非平滑筋型アイソフォームの発現増加に一致して、BrdUの取り込みが、培養3日目を最大に一過性に増加した。2. コンフルエントの細胞を、2日間血清を含まない培地で培養し、再び血清刺激を行うと、刺激1.5時間で、非平滑筋型αトロポミオシンの発現が増加した。血清濃度1%から増強作用が認められ、3%で最大効果に達した。この時、非平滑筋型アイソフォームの発現は刺激前の約2倍に増加した。3. 血清再添加による非平滑筋型アイソフォーム発現増加は、H-7処理により完全に抑制されたが、wortmanninは有意な抑制作用を示さなかった。4. phorbil 12,13 dibutyrateは、血清刺激と同様に、刺激1.5時間で非平滑筋型アイソフォーム発現を増加させた。1nMから増強作用が認められ、100nMで最大効果に達した。この時、非平滑筋型アイソフォームの発現は刺激前の約2倍に増加した。5. Phorb01 12,13 dibutyrateは、1.5時間あるいは24時間刺激を行っても、BrdU取り込みには影響を与えなかった。血清刺激も、1.5時間ではBrdU取り込みを増加させなかったが、24時間刺激を続けると、濃度依存性にBrdU取り込みを増加させた。血管平滑筋細胞は、増殖性増加に伴い、脱分化し、非平滑筋型αトロポミオシンが増加する。この非平滑筋型アイソフォーム増加には、Cキナーゼが関与することが示唆された。Cキナーゼ依存性発現調節は、細胞周期がS期に入る前、おそらく、GO/Gl移行期に生じると考えられた。

今年的研究是为了阐明与血管平滑肌转化一起调节α-巴皮霉素同工型转化的信息传递机制。 1。培养平滑肌细胞导致在培养的第3-5天最多最大程度地增加了非平滑肌α-胶质素的表达。与非平滑肌同工型的表达增加一致，在培养的第3天，BRDU摄取的最大和瞬时增加。 2。在无血清培养基中培养融合细胞2天，然后再次添加血清，并在1.5小时的刺激后表达非平滑肌肉型α-热霉素的表达增加。在1％的血清浓度下观察到增强效应，并以3％达到最大效果。目前，非平滑肌同工型的表达增加了刺激之前的两倍。 3。由于H-7治疗而完全抑制了由于血清重新加成而导致的非平滑肌同工型表达增加，但沃尔特曼宁没有明显的抑制作用。 4。Porbil12,13二丁酸酯在1.5小时的刺激下增加了非平滑肌同工型的表达，类似于血清刺激。从1 nm观察到增强效应，并在100 nm处达到最大效果。目前，非平滑肌同工型的表达增加了刺激之前的两倍。 5。PHORB0112,13二丁酸酯即使在刺激1.5或24小时后也对BRDU摄取也没有影响。血清刺激也没有在1.5小时时增加BRDU的摄取，但以浓度依赖性方式持续刺激24小时增加了BRDU的摄取。血管平滑肌细胞会随着增殖性的增加而去分化，从而导致非平滑肌α-肌球蛋白增加。有人提出，C激酶参与了非平滑肌肉同工型的这种增加。 C激酶依赖性表达调节被认为发生在细胞周期进入S相之前，也许是在GO/GL过渡阶段。