不定胚形成におけるホメオボックス遺伝子の役割

同源框基因在体细胞胚胎发生中的作用

基本信息

批准号：
10158204
负责人：
出村拓
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10158204/
关键词：
不定胚ホメオボックス遺伝子 CHB遺伝子形質転換子葉胚軸

项目摘要

(1) CHB1の機能解析これまで35Sプロモーター支配下でセンス及びアンチセンスRNAを恒常的に過剰発現させることでCHB1の機能解析を進めてきた。本年度はグルココルチコイド誘導型プロモーターを用いてCHB1の機能を調べた。まず、グルココルチコイドであるデキサメタゾン(DEX)を不定胚誘導時から与え、CHB1センスまたはアンチセンスRNAを過剰発現させた。その結果、いずれの過剰発現でも35Sプロモーターによる発現改変と同様に、センスRNAによる子葉の形態異常、アンチセンスRNAによる不定胚形成率の低下と魚雷型胚から幼植物体への進行の抑制、が起こった。また、不定胚誘導1週間後にDEXを与えてアンチセンスRNAを過剰発現させた場合でも、不定胚形成率が下がりカルス増殖が起こった。この結果から、誘導後1週間目以降にもCHB1が機能していることが示唆された。(2) CHB3〜6の機能解析CHB3〜6のセンス及びアンチセンスRNAの過剰発現実験をこれまで繰り返し試みたが、いずれの場合でも形態異常は見られなかった。(3) CHB2の発現解析CHB2についてin situ hybridizationを行い、不定胚形成における発現様式を解析した。CHB2はRNAゲルブロット解析により心臓型胚の時期に一過的に発現が上昇する事がわかっている。in situ hybridizationの結果、CHB2は心臓型胚では子葉原基の付け根部分に発現し、魚雷型胚では管状要素とその周辺の細胞に局在していた。

(1)CHB1的功能分析迄今为止，我们一直通过在35S启动子的控制下不断过表达正义和反义RNA来进行CHB1的功能分析。今年，我们使用糖皮质激素诱导型启动子研究了 CHB1 的功能。首先，从体细胞胚胎诱导时开始给予糖皮质激素地塞米松（DEX）以过度表达CHB1有义或反义RNA。结果，在这两种过表达的情况下，与35S启动子的表达修饰类似，有义RNA导致子叶形态异常，而反义RNA则导致体细胞胚形成率降低并抑制鱼雷形发育。胚胎到小植株的事情发生了。此外，即使在体细胞胚诱导一周后给予DEX以过度表达反义RNA，体细胞胚形成率也会降低并且发生愈伤组织增殖。该结果表明CHB1甚至在诱导后1周后仍发挥作用。 (2)CHB3-6的功能分析我们多次尝试CHB3-6的正义和反义RNA的过表达实验，但在任何情况下都没有观察到形态异常。 (3)CHB2的表达分析我们对CHB2进行了原位杂交并分析了其在体细胞胚胎发生过程中的表达模式。 RNA凝胶印迹分析显示CHB2的表达在心形胚胎阶段短暂增加。原位杂交显示，CHB2在心形胚胎的子叶原基基部表达，在鱼雷形胚胎的管状元件和周围细胞中表达。