発現遺伝子のカタログ化による維管束組織分化初期過程の分子機構の解析

通过表达基因编目分析血管组织分化早期过程的分子机制

基本信息

批准号：
09740587
负责人：
出村拓
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

維管束組織分化の初期過程に発現する遺伝子をその発現様式や機能をもとにカタログ化することを通して、維管束組織分化の初期過程おける分子機構に迫ることを目的とした解析を行った。まず、ヒャクニチソウin vitro管状要素分化系の形態形成に先立つ過程で発現する遺伝子を単離し、次に、単離した遺伝子の維管束組織における発現様式を明らかにする。そして、これまでに単離しているTED遺伝子群の発現様式を含めて、発現様式と機能による遺伝子のカタログ化を試みる。このような発現遺伝子のカタログ化により、これまで明らかにされてこなかった維管束組織分化の初期過程で進行している分子機構の一側面に迫れるものと考えた。1 TED4タンパク質の機能解析を試みた。TED4タンパク質はオオムギの糊粉層特異的脂質輸送タンパク質(LTP2)の配列と類似している。LTP2はシステインプロテアーゼの阻害活性を持つことが報告されており、TED4タンパク質が管状要素分化の細胞死に関連して発現するシステインプロテアーゼ活性を阻害することが予想された。そして、大腸菌を用いて発現させた組み換えTED4タンパク質がシステインプロテアーゼ活性の一部を阻害することを明らかにした。また、ヒャクニチソウin vitro管状要素分化系を用いたトランジェントアッセイ法を開発し、TED3プロモーターの詳細な解析を行った。TED3タンパク質が新規のアラビノガラクタンタンパク質をコードしている可能性を明らかにした。2 ヒャクニチソウin vitro管状要素分化系を用いて、維管束組織分化の初期過程に発現する新たな遺伝子の単離を試みた。このために、PCRを併用するサブトラクション法と均一化ライブラリーの構築を行った。

我们进行了分析，目的是通过基于其表达格式和功能在血管组织分化的初始过程中表达的目录基因来靠近血管组织分化的初始过程。首先，在体外管状元素分化系统的形态发生之前表达的基因是分离的，然后阐明了血管组织中分离基因的表达模式。然后，我们尝试根据其表达样式和功能来对其进行分类，包括到目前为止已经隔离的TED基因的表达样式。通过对这样的表达基因进行分类，我们认为可以看到血管组织分化的早期阶段进展的一个方面，尚未澄清。 1我们试图分析TED4蛋白的功能。 TED4蛋白与大麦粘贴特异性脂质转运蛋白（LTP2）的序列相似。据报道，LTP2具有半胱氨酸蛋白酶的抑制活性，并且预测TED4蛋白会抑制与细胞死亡相关的肾小管元素分化中与细胞死亡相关的半胱氨酸蛋白酶活性。然后发现，使用大肠杆菌表达的重组Ted4蛋白抑制了一些半胱氨酸蛋白酶活性。此外，开发了使用体外管状元素分化系统的瞬时测定，并对TED3启动子进行了详细分析。我们揭示了Ted3蛋白编码一种新型阿拉伯分离素蛋白的可能性。 2我们试图在体外使用管状元素分化系统在血管组织分化的早期阶段分离出新的基因。为此，将使用PCR的减法与构造库的构建结合使用。