シナプスにおけるプロトカドヘリンの局在

原钙粘蛋白在突触的定位

基本信息

批准号：
10156246
负责人：
平野伸二
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロトカドヘリンは、カドヘリンスーパーファミリーに属する細胞間接着分子であり、特に中枢神経系で特異的に発現しているものが多い。我々は、これまでに、OL-プロトカドヘリンと命名した新規のプロトカドヘリンを同定し、その基本的性質を明らかにした。さらに、発現を解析したところ、OL-プロトカドヘリンは神経回路形成に密接に関与していることが示唆された。そこでは、OL-プロトカドヘリンがシナプス結合に関与する可能性が考えられた。そこで、シナプスとの関連を検討した。まず、タンパクの分布を調べてみると、OL-プロトカドヘリンタンパクは臭球ではシナプス形成の場であるグロメルラスに局在することがわかった。また、生後5日の小脳では、下オリーブ核からの登上線維がプルキンエ細胞とシナプスを形成することが知られているが、ちょうどこの時期のプルキンエ細胞と下オリーブ核はともにOL-プロトカドヘリン発現しているばかりか、そのタンパクはプルキンエ細胞の周囲に分布していた。これらの分布は、OL-プロトカドヘリンがシナプスに局在することを示唆していた。しかし、初代培養細胞でのタンパクの局在を調べたところ、非常に細かな顆粒状にシグナルが見られたが、これはシナプトフィジンの局在とは一致しなかった。一方、OL-プロトカドヘリンのC末端部分はPDZドメインの認識配列とよく似ていることから、シナプスに局在するPSD95との結合の可能性が考えられた。実際にPSD95で免疫沈降すると、わずかながらOL-プロトカドヘリンが共沈してくることが明らかになった。現在、OL-プロトカドヘリンとPSD95のトランスフェクタントを作成中で、両者の局在の変化や結合性を解析することにより、この問題を解決したいと考えている。

原钙粘蛋白是属于钙粘蛋白超家族的细胞间粘附分子，其中许多在中枢神经系统中特异性表达。我们之前鉴定了一种新型原钙粘蛋白，命名为OL-原钙粘蛋白，并阐明了其基本性质。此外，表达分析表明OL-原钙粘蛋白与神经回路的形成密切相关。因此，认为OL-原钙粘蛋白可能参与突触连接。因此，我们研究了与突触的关系。首先，通过检查蛋白质的分布，我们发现 OL-原钙粘蛋白位于肾小球中，即气味球中突触形成的部位。此外，已知来自下橄榄核的攀爬纤维在出生后第5天与小脑中的浦肯野细胞形成突触，并且在这个阶段浦肯野细胞和下橄榄核都表达OL-原钙粘蛋白。蛋白质也分布在浦肯野细胞周围。这些分布表明 OL-原钙粘蛋白位于突触处。然而，当我们研究该蛋白质在原代培养细胞中的定位时，我们在非常细的颗粒中发现了信号，但这与突触素的定位不匹配。另一方面，由于OL-原钙粘蛋白的C末端部分与PDZ结构域的识别序列非常相似，因此认为它可能与位于突触的PSD95结合。当用PSD95进行免疫沉淀时，发现少量的OL-原钙粘蛋白被共沉淀。我们目前正在创建 OL-原钙粘蛋白和 PSD95 的转染子，并希望通过分析两者的定位和结合的变化来解决这个问题。