Rho/Ca^<2+>経路を介したアクチン再構築とシナプス可塑性

通过 Rho/Ca^<2+> 途径进行肌动蛋白重塑和突触可塑性

• 批准号: 10156220
• 负责人: 尾藤 晴彦
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10156220/
• 关键词: Rho; P160 Rock; Citorn; NMDA受容体; シナプス

(1) Rho標的蛋白質p160ROCKの神経様細胞における作用点と作用機構の解明低分子量G蛋白質Rhoおよびその下流の標的キナーゼp160ROCKは、神経回路網形成・維持に必須な役割を担うと考えられている。そこで本研究計画では、NIE-115細胞でLPA依存性の神経突起退縮反応にp160ROCKが関与している可能性を検討した。p160ROCK阻害剤Y-27632は、用量依存的にN1E-115細胞の突起退縮を完全に抑制することを見出した。また、p160ROCKのドミナント・アクチブ体で突起退縮が刺激非依存性に起こること、p160ROCKのドミナシト・ネガチブ体によって突起退縮が抑制され、逆に突起進展がおこること、などからp160ROCK活性化が突起形成制御に必須の役割を持つことを発見した。(2) グルタミン酸性シナプスにおけるRho標的蛋白CitronとPSD-95の結合の発見我々はRho標的分子Citron(正確には、キナーゼを含まない神経型Citron-N)がそのC末端に典型的なPDZ結合配列を有するPSD蛋白であること、またその免疫原性が初代培養神経細胞にて一部樹状突起スパインと一致すること、等に注目し、CitronとシナプスPSD分画の蛋白、例えばPSD-95と複合体をつくるか検討した。この結果、Citronは多くのグルタミン酸性シナプスにてPSD-95と結合し、NMDA受容体と同一の蛋白複合体に属しうる事が明らかになった。さらに、Citronが、視床や大脳皮質の神経細胞に多く認められ、海馬錐体細胞には発現していないが、海馬のGABA性抑制性介在神経細胞上に存在するグルタミン酸性シナプスに強く発現していることが判明した。

（1）阐明Rho靶蛋白P160ROCK在神经样细胞中的作用点和作用机理，低分子量G蛋白Rho及其下游靶激酶P160ROCK被认为在神经网络的形成和维持中起着至关重要的作用。因此，在这项研究中，我们研究了p160Rock参与NIE-115细胞中LPA依赖性神经突回答的可能性。发现P160ROCK抑制剂Y-27632以剂量依赖性方式完全抑制N1E-115细胞的突出回归。 Furthermore, we discovered that p160ROCK activation has an essential role in controlling protrusion formation, such as that protrusion retraction occurs in a stimulus-independent manner in the dominant-active body of p160ROCK, and that protrusion retraction is suppressed by the dominant-active body of p160ROCK, and that protrusion progression occurs, and that p160ROCK activation has an essential role in控制突出形成。 (2) Discovery of the binding of the Rho target protein Citron and PSD-95 in glutamic acid synapses We focused on the fact that the Rho target molecule Citron (to be precise, the neural type Citron-N without kinase) is a PSD protein with a typical PDZ binding sequence at its C-terminus, and that its immunogenicity is partially consistent with dendritic spines in primary cultured神经元，以及是否与Citron和突触PSD分数蛋白（例如PSD-95）形成复合物。这表明Citron在许多谷氨酸突触下与PSD-95结合，并且可以属于与NMDA受体相同的蛋白质复合物。此外，发现在丘脑和脑皮质的神经元中发现的谷氨酸突触中发现了石柑体高度表达，而不是在海马金字塔细胞中，但在谷氨酸抑制性抑制性神经元中的谷氨酸突触中强烈表达。

项目成果

Furuyashiki, T.: "Citron, a Rho-target, interacts with PSD-95/SAP-90 at glutamatergic synapses in the thalamous." J.Neurosci.19. 109-118 (1999)

Furuyashiki, T.：“Citron 是一种 Rho 靶点，与丘脑谷氨酸能突触处的 PSD-95/SAP-90 相互作用。”