海馬錐体細胞樹状突起スパインダイナミクスの可視化技術の開発

海马锥体细胞树突棘动力学可视化技术开发

基本信息

批准号：
16650080
负责人：
尾藤晴彦
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650080/
关键词：
GFP アクチンスライス培養タイムラプスイメージング海馬

项目摘要

GFP-actinによるスパイン内アクチン動態可視化の実験系を効率的に得る目的で実験を行い、次のような成果を得た。1)GFP-actinマウスのホモ化C57BL/6の遺伝背景へ戻し交配中のGFP-actinマウスを繁殖させ、GFP-actinマウス同士を交配させ、transgeneを両アレルに持つ個体を複数作成した。これらのオス・メス同士を交配させることにより、このようなラインをなるべく多く作成することを試みた。しかし、ホモ化されたラインはいずれも繁殖能が落ちていた。現在、さらにヘテロのラインを増やし、スライス作成に十分貢献可能なラインを樹立する工夫を行っている。2)GFP-actinを用いた樹状突起ダイナミクスのin vitro可視化マウス海馬スライス培養系をセットアップし、遺伝子銃・ウィルス等によるGFP-actin, mRFP1-actin, Venus-actinなどの導入後、蛍光シグナル観察のタイムラプスを行えるための最適化な条件設定を実施した。この過程で、海馬錐体細胞のみならず、小脳顆粒細胞や小脳プルキンエ細胞におけるGFP-actin動態観察も可能となり、現在並行して観察を行っている。

我们进行了实验，以有效地获得使用 GFP-肌动蛋白可视化椎内肌动蛋白动力学的实验系统，并获得了以下结果。 1) GFP-肌动蛋白小鼠的同质化我们将GFP-肌动蛋白小鼠与C57BL/6遗传背景进行回交，将GFP-肌动蛋白小鼠彼此杂交，并产生多个在两个等位基因中都带有转基因的个体。通过培育这些雄性和雌性，我们试图创造尽可能多的像这样的品系。然而，所有同质化品系的繁殖能力均降低。目前，我们正在努力增加异质系的数量，并建立能够充分促进切片创建的系。 2）利用GFP-actin进行树突动态的体外可视化通过基因枪、病毒等导入GFP-actin、mRFP1-actin、Venus-actin等，建立小鼠海马切片培养系统，观察荧光信号。已设置为启用延时拍摄。这一过程使得不仅在海马锥体细胞中观察GFP-肌动蛋白动态成为可能，而且在小脑颗粒细胞和小脑浦肯野细胞中观察GFP-肌动蛋白动态成为可能，目前我们正在进行平行观察。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

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