脳を標的としたバイオターゲティングとその遺伝子のクローニング

大脑的生物靶向及其基因克隆

• 批准号: 10145252
• 负责人: 澤田 誠
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145252/
• 关键词: ミクログリア; 遺伝子導入; 脳特異的; バイオターゲティング; 血液脳関門

1 脳特異的な細胞移入の調節メカニズムの検討ラット個体を用いてミクログリアの脳特異的侵入の条件を検討し、外来遺伝子を脳に特異的に発現させることに成功した。また、導入した遺伝子産物の活性測定によって細胞の移入量を定量することができるようになった。(1) マクロファージ注入の場合、脳にはほとんど蛍光細胞が見られないが肝臓には多く見られた。ミクログリア注入の場合には脳には多く、肝臓にはわずかしか見られなかった。(2) lacZ発現ベクターを導入した細胞を注入したラット脳切片でlacZ陽性細胞が確認できた。(3) 2と同様の切片でのβ-galactosidase活性が検出できた2 組換えファージの生物活性のスクリーニングの確立培養脳血管内皮細胞による再構成血液脳関門システムでミクログリアの血液脳関門を形成している血管内皮細胞への特異的接着現象が再現できるようになった。3 脳特異的な細胞移入に関与する分子の単離同定ミクログリア細胞株からmRNAを精製してcDNAを合成し、ファージディスプレイライブラリーに組み込みをおこなった。また、ランダムペプチドライブラリーも作成し脳特異的接着に関わる脳側の因子(ホーミングレセプター)の検索も行える準備が整った。

1对大脑特异性细胞调节细胞转移机制的检查，我们使用大鼠个体研究了小胶质细胞的大脑特异性进入的条件，并成功地在大脑中专门表达了外国基因。此外，可以通过测量引入的基因产物的活性来量化传递的细胞量。 （1）在巨噬细胞注射的情况下，在大脑中几乎没有发现荧光细胞，但大多数在肝脏中发现。小胶质细胞注射在大脑中更常见，在肝脏中只有少数。 （2）LACZ阳性细胞在注入LacZ表达载体引入的细胞的大鼠脑切片中得到证实。 （3）在与2中相似的部分中检测到β-半乳糖苷酶活性。建立了使用培养的脑血管内皮细胞重建了重组噬菌体重组噬菌体重建血脑屏障系统的筛选，该现象是特异性粘附的现象，使其对血脑内皮细胞的特异性粘附现象形成了脑膜链接的脑膜链接，现在可以屈服于微神经元素。 3将参与脑特异性细胞转移mRNA参与的分子的分离和鉴定从小胶质细胞系纯化以合成cDNA，并掺入噬菌体显示库中。我们还创建了一个随机的肽库，并准备搜索涉及大脑特异性粘附的脑部因素（归因受体）。

项目成果

Kunihiko Asakura: "Differentiation-specific mRNA expression of a mouse bipotential gloal cell line" Neurosci Lett. 258. 21-24 (1998)

Kunihiko Asakura：“小鼠双能球细胞系的分化特异性 mRNA 表达” Neurosci Lett。

Makoto Sawada: "IL-10 inhitaits both production of cytokines and expression of cytokine receptors in microglia" J.Neurochem.in press. (1999)

Makoto Sawada：“IL-10 抑制小胶质细胞中细胞因子的产生和细胞因子受体的表达”J.Neurochem.in press。

Makoto Sawada: "Brain-specific gene expression by immotalized microglial cell-mediated gene transfer in the mammalian brain" FEBS Letters. 433. 37-40 (1998)

Makoto Sawada：“哺乳动物大脑中通过永生化小胶质细胞介导的基因转移实现大脑特异性基因表达”FEBS Letters。

Makoto Sawada: "Pathophysidogical significance of cytokine network in the brain" Brain and Biodifence (Oomura,Y and Hori,T eds.). 217-228 (1998)

Makoto Sawada：“大脑中细胞因子网络的病理生理学意义”Brain and Biodifence（Oomura，Y 和 Hori，T eds.）。

澤田誠: "神経系の分化とサイトカイン" Clin Neurosci. 16. 406-408 (1998)

Makoto Sawada：“神经系统分化和细胞因子”Clin Neurosci 16. 406-408 (1998)。