コンビケムを用いた生理活性糖鎖を認識するペプチドリガンドの取得

使用 Combichem 获得识别生物活性糖链的肽配体

基本信息

批准号：
10145232
负责人：
福崎英一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1) 糖鎖を認識するペプチド配列のスクリーニング生理活性糖鎖(β-グルカン)を修飾し、マトリクス(疎水性および親水性)上に共有結合で固定化し、バイオパニングのターゲットを調製した。ターゲット固定用マトリクスとして、ポリスチレン(疎水性)および多糖系親水性マトリクスを用いた。バイオパニングの溶出条件として、酸、塩基、拮抗溶出を検討した。親水性マトリクスを用いたスクリーニングにおいて、吸着率の上昇が観測された。ペプチドの配列を調べたところ、Thrが頻出しており、配列に若干の偏りが認められた。残念ながら、現在のところ、ターゲットと強いアフィニティーを示すペプチド配列は得られていない。2) 糖鎖を認識するDNAアプタマーの取得100塩基のランダムDNAライブラリー(59残基のランダム配列を含む)を糖鎖を固定化したマトリクスに対してアフィニティーセレクションを行い、糖鎖を認識する配列を選抜した。8ラウンドアフィニティーセレクションを経て得られたDNAをクローニングし、各クローンの塩基配列を比較したところ、ほとんどのクローンは4〜個のグアニンクラスターを複数個内包しており、かつそれらグアニンクラスター周辺は回文配列になっていることがわかった。また、これらのクローン化学合成してキチンカラムに通したところ、結合能を有していることがわかった。

1）对识别聚糖的肽序列进行筛选，对生物活性聚糖（β-葡聚糖）进行了修改，并在基质（疏水和疏水性）上共价固定在生物剂上，以准备生物剂的靶标。聚苯乙烯（疏水）和多糖亲水基质用作靶固定基质。研究了酸，碱和拮抗作用，作为生物动物的洗脱条件。在使用亲水性基质筛选时观察到吸附率的提高。当检查肽序列时，经常产生THR，并且序列有轻微的偏差。不幸的是，目前尚无表现出与靶标有强亲和力的肽序列。 2）获得识别聚糖的DNA适体是100碱基随机DNA文库（包括59个残基的随机序列）是在矩阵上的亲和力选择，其中聚糖被固定，并且选择了识别聚糖的序列。克隆通过8轮亲和力选择获得的DNA，并比较每个克隆的碱基序列。发现大多数克隆都包含多个4到鸟嘌呤簇，并且这些鸟嘌呤簇的周围环境是寄生虫序列。此外，当这些克隆化学合成并通过几丁质柱时，发现它们具有结合能力。