オボグリコプロテインを固定化した充填剤による光学分割

使用固定有卵糖蛋白的包装材料进行光学分辨率

• 批准号: 08672492
• 负责人: 萩中 淳
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Mukogawa Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672492/
• 关键词: オボグリコプロテイン; 光学認識; オボムコイド; 光学分割用固定相

従来、ニワトリ卵白中の粗オボムコイド(OMCHI)から2ステップで行っていたオボグリコプロテイン(OGCHI)の単離をカチオン交換クロマトグラフィーを用いる1ステップで行う方法を開発した。得られたOGCHIの純度は99%であり、OGCHIを固定化した充填剤の光学認識能も従来の2ステップ法と同等であった。その結果、容易に大量のOGCHIの分取が可能となった。精製したOMCHIには、光学認識能がなく、OGCHIは優れた光学認識能を示し、粗OMCHIには、約10%のOGCHIが含まれていることが明かとなっていた。しかしながら、粗OMCHIをN,N'-disuccinimidyl carbonateで活性化したアミノプロピルシリカゲルに固定化した場合の光学認識能をベンゾイン、クロルフェニラミン、イブプロフェンを用いて検討したところ、予測される光学認識能より優れた光学認識能を示した。OMCHIとOGCHIの固定化量を詳細に検討したところ、反応前の粗OMCHIのOGCHI/(OGCHI+OMCHI)比は、0.11であるのに対して、反応後のシリカゲルへの固定化比は、0.23であった。このことは、OGCHIが選択的にシリカゲルに固定化されることを示している。以上の結果、粗OMCHIの予測以上の光学認識能は、OGCHIのシリカゲルへの選択的な固定化によることが明かとなった。OGCHIの糖鎖の光学認識に及ぼす影響を検討するために、脱シアル酸オボグリコプロテイン(asialo OGCHI)を固定化した充填剤を合成し、光学認識能についてOGCHI固定化充填剤と比較検討した。その結果、シアル酸残基の除去は光学認識能には大きな影響を与えないことが明らかとなった。現在、他の酵素を用いる糖鎖の選択的な除去および得られたタンパク質の光学認識能について検討中である。

我们开发了一种使用阳离子交换色谱法从鸡蛋清中的粗卵类粘蛋白 (OMCHI) 中分离卵糖蛋白 (OGCHI) 的一步方法，该方法之前是分两步完成的。所得OGCHI的纯度为99%，固定化OGCHI的填充材料的光学识别能力也与传统的两步法相当。结果，可以容易地分离大量的OGCHI。结果表明，纯化的OMCHI没有光学识别能力，而OGCHI表现出优异的光学识别能力，粗制OMCHI含有约10%的OGCHI。然而，当我们使用安息香、氯苯那敏和布洛芬研究固定在用N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯活化的氨丙基硅胶上的粗制OMCHI的光学识别能力时，我们发现预测的光学识别能力显示出优异的光学识别能力。对OMCHI和OMCHI固定量的详细研究表明，反应前粗OMCHI的OMCHI/(OGCHI+OMCHI)比率为0.11，而反应后在硅胶上的固定比率为0.23。这表明OGCHI被选择性地固定在硅胶上。上述结果表明，粗OMCHI比预期更高的光学识别能力归因于OGCHI在硅胶上的选择性固定。为了研究OGCHI对糖链光学识别的影响，我们合成了一种固定有去唾液酸化卵糖蛋白的包装材料（asialo OGCHI），并比较了其与固定有OGCHI的包装材料的光学识别能力。结果表明，唾液酸残基的去除不会显着影响光学识别能力。我们目前正在研究使用其他酶选择性去除糖链以及所得蛋白质的光学识别能力。