血管平滑筋細胞ATP感受性Kチャネルのチロシンキナーゼによる活性調節

酪氨酸激酶对血管平滑肌细胞 ATP 敏感 K 通道活性的调节

基本信息

批准号：
08670130
负责人：
北村憲司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウサギ門脈平滑筋細胞をコラゲナーゼで単離し、ピナシジルで惹起される膜電流(ATP感受性K電流:K-ATP)を記録し、チロシンキナーゼ阻害薬およびチロシンフォスファターゼの効果を観察しK-ATPチャネル活性に対するチロシンキナーゼの意義を検討した。特異的チロシンキナーゼ阻害薬であるgenisteinは濃度依存的にK-ATP電流を抑制し、そのIC50値は5.5uMであった。genisteinは同じ細胞の電位依存性Ba電流、Ca依存性K電流、電位依存性K電流に対しても抑制効果を持っていたが、そのIC50は約100uMと高かった。Na-orthovanadataはK-ATP電流の振幅を有意に増強したが、genisteineの不活性アナログであるdaidzeinは全く抑制効果を持っていなかった。EGF receptor kinaseに特異的なチロシンキナーゼであるherbimycin A,lavendustin Aやtyrphostin 23はK-ATPを抑制することはなかった。またEGF自身によっても外向き電流は惹起されたりK-ATP電流を増強する作用は認められなかった。一方、広範囲なチロシンキナーゼ阻害作用を持つtyrphostin B46(30uM)はgenisteinと同等の抑制効果を持っていた。cell-attachedやinside-out下で記録できるK-ATPチャネル電流に対してgenisteinはsingle channel電流の振幅を変えることなく平均開口時間を減少させた。以上の結果からウサギ門脈においてピナシジルで誘発されるK-ATP電流はその活性化の過程でチロシンキナーゼによる調節を受けている可能性が強く示唆された。チロシンキナーゼの種類については分からないが、EGF receptorに関連するキナーゼでないと考えられる。また、inside-out下でもenisteinの抑制作用が記録できることから、K-ATPチャネル活性に関与するチロシンキナーゼは細胞膜ないし膜直下に存在する可能性が高いと考えられた。

用胶原酶分离兔子门户平滑肌细胞，并记录pinacidil（ATP敏感的K电流：K-ATP）诱导的膜电流，并研究了酪氨酸激酶抑制剂和酪氨酸磷酸酶的作用，并研究了酪氨酸激酶对酪氨酸激酶对K-ATP通道活性的重要性。染料木黄酮是一种特定的酪氨酸激酶抑制剂，以浓度依赖性方式抑制K-ATP电流，其IC50值为5.5UM。染料木黄酮在同一细胞中对依赖电压依赖性的Ba，Ca依赖性K和电压依赖性K电流具有抑制作用，但其IC50在约100UM时高。 Na-othovanadata显着增强了K-ATP电流的幅度，而大二肽（Genisteine）的惰性类似物的大泽（Daidzein）没有抑制作用。 Herbimycin A，Lavendustin A和Tyrphostin 23，EGF受体激酶的特异性酪氨酸激酶，没有抑制K-ATP。此外，EGF本身观察到没有产生外部电流或增强K-ATP电流的效果。另一方面，具有广泛的酪氨酸激酶抑制作用的Tyrphostin B46（30UM）具有与染料木黄酮相同的抑制作用。对于可以在细胞连接或内而外记录的K-ATP通道电流，染料木黄酮会减少平均孔径时间，而不会改变单个通道电流的幅度。这些结果强烈表明，在兔子门静脉中，皮纳基迪诱导的K-ATP电流在其激活过程中受酪氨酸激酶的调节。尽管酪氨酸激酶的类型尚不清楚，但据认为它不是与EGF受体相关的激酶。此外，由于即使在内外之下也可以记录鉴定的抑制作用，因此人们认为，与K-ATP通道活性相关的酪氨酸激酶很可能存在于细胞膜中或直接在膜下方。