自然免疫シグナル伝達因子STINGに着目したエンドソームの選別輸送メカニズム解明

以先天免疫信号转导因子STING为中心阐明内涵体的选择性转运机制

基本信息

批准号：
22KJ1908
负责人：
飯伏純平
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1908/
关键词：
自然免疫 A群レンサ球菌 STING リソソーム分解経路

项目摘要

本年度では、A群レンサ球菌感染によるSTINGの局在変化について、DNAセンサータンパク質であるcGAS（cyclic GMP-AMP synthase）欠損細胞を用いて検証した。その結果、cGAS欠損細胞は野生型細胞と同様にA群レンサ球菌感染によりSTINGの局在変化が認められた。A群レンサ球菌が産生するサイクリックジヌクレオチドによりSTINGは反応して局在を変化する可能性が示唆された。またSTING欠損細胞における細菌の分解経路について、オートファジーは誘導せずに主にエンドソーム/リソソーム経路で分解されるStreptolysin O（SLO）欠損株を用いて細胞内の菌数を評価した。その結果、STING欠損細胞では野生型細胞と比較して細胞内の菌数が優位に減少していた。さらにエンドソーム/リソソーム経路で分解されるEGFRの分解ついて検証した結果、野生型よりもSTING欠損細胞で分解が促進していた。以上よりSTING欠損細胞においてエンドソーム/リソソーム分解経路が亢進していることが示唆された。次にエンドソーム/リソソーム分解経路で分解物の選別に関わるESCRTタンパク質に着目し、共免疫沈降法を用いて相互作用を検証した。その結果、複数のESCRTタンパク質とSTINGが相互作用することがわかった。

今年，我们使用缺乏 DNA 传感器蛋白 cGAS（环 GMP-AMP 合酶）的细胞检查了 A 组链球菌感染导致的 STING 定位变化。结果，与野生型细胞类似，cGAS 缺陷细胞在感染 A 组链球菌后，STING 定位发生变化。有人提出，STING 可能会响应 A 族链球菌产生的环状二核苷酸而改变其定位。此外，关于STING缺陷细胞中的细菌降解途径，我们使用链球菌溶血素O（SLO）缺陷菌株评估了细胞中的细菌数量，该菌株主要通过内体/溶酶体途径降解，而不诱导自噬。结果，与野生型细胞相比，STING 缺陷细胞的细胞内细菌数量显着减少。此外，我们检查了 EGFR 的降解，EGFR 通过内体/溶酶体途径降解，发现与野生型细胞相比，STING 缺陷细胞中的降解加速。这些结果表明内体/溶酶体降解途径在 STING 缺陷细胞中得到增强。接下来，我们重点关注参与内体/溶酶体降解途径中降解产物选择的 ESCRT 蛋白，并使用免疫共沉淀验证了它们的相互作用。结果表明，STING 与多种 ESCRT 蛋白相互作用。