ケツルアズキ種子発芽期における遺伝子発現に関与する転写制御因子の解析

红小豆种子萌发阶段基因表达转录调控因子分析

基本信息

批准号：
07740625
负责人：
山内大輔
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ケツルアズキ発芽種子の子葉で高い発現を示すα-アミラーゼとシステインプロテアーゼSH-EPの両遺伝子の発現制御機構を解明するために以下のような研究を進めた。1.両遺伝子のプロモーター領域をβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子に結合した融合遺伝子を作製した。これらの融合遺伝子を発芽時の各段階のケツルアズキ種子の子葉に粒子銃によって導入した。その結果、吸水後1日目の子葉で最も高い活性がみられた。SH-EP遺伝子の5´-上流域を削っていき、それらを結合したGUS融合遺伝子の発現量を調べた。その結果、-164までの長さのものでも比較的高い活性がみられた。2.他の植物遺伝子のプロモーター領域のACGTというモチーフを含む配列に結合するタンパク質が存在することが既に知られている。このACGTを含む配列はアミラーゼ遺伝子のプロモーター領域には2カ所あり、その共通配列はTACGTCAであった。一方、SH-EP遺伝子にもそれとよく似たTACGTCCという配列がみられた。これらの配列に結合するタンパク質を発芽種子の子葉より調製した粗核抽出液を用いて調べた。その結果、アミラーゼ遺伝子の配列への結合活性は0日目と2日目の子葉中に存在した。一方、SH-EP遺伝子の配列への活性は0日目にはみられたが、2日目ではみられなかった。3.SH-EP遺伝子のプロモーター領域の欠削変異体を用いた結果や、ACGT配列結合タンパク質の存在様式よりこのタンパク質はその遺伝子発現の活性化には機能していないことが推定された。しかしながら、アミラーゼ遺伝子ACGT配列の結合タンパク質はSH-EP遺伝子のものと存在様式が違うので、両遺伝子のACGT配列には異なるタンパク質が結合していることが推定された。

进行了以下研究，以阐明α-淀粉酶和半胱氨酸蛋白酶SH-EP的表达控制机制，它们在发芽的Azuki种子的子叶中高度表达。 1。制备了一个融合基因，其中两个基因的启动子区域都与β-葡萄糖醛酸酶（GUS）基因结合。这些融合基因在发芽的每个阶段都通过粒子枪引入木质种子的子叶。结果，在吸水后的第一天，在子叶中观察到最高的活性。去除了SH-EP基因的5'上游区域，并检查了与它们结合的GUS融合基因的表达水平。结果，还观察到相对较高的活动的长度为-164。 2。已经知道，存在与其他植物基因启动子区域中含有基序ACGT的序列结合的蛋白质。在淀粉酶基因的启动子区域中，有两个序列，共有序列是tacGTCA。另一方面，SH-EP基因也具有类似的序列，称为TACGTCC。使用从发芽种子的子叶制备的粗核提取物检查与这些序列结合的蛋白质。结果，在第0和第2天，淀粉酶基因与序列的结合活性存在于子叶中。另一方面，在第0天，SH-EP基因在序列上的活性观察到了第2天，但在第2天，但不使用突变体的结果。使用突变体缺乏SH-EP基因的启动子和ACGT的蛋白质蛋白质的蛋白质的蛋白质，该蛋白质的蛋白质与蛋白质的构成方式相结合。表达。然而，由于淀粉酶基因ACGT序列的结合蛋白与SH-EP基因的结合蛋白不同，因此估计不同的蛋白质与这两个基因的ACGT序列结合。