プロトンポンプの胃壁細胞における特異的転写と細胞内輸送機構の解析

胃壁细胞质子泵特异性转录及胞内转运机制分析

基本信息

批准号：
07780536
负责人：
岡敏彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780536/
关键词：
組織特異的転写制御 GATA-GT1 GATA-GT2 胃粘膜細胞

项目摘要

転写因子GATA-GT1またはGATA-GT2と相互作用するタンパク質の検索を目的として、本年度の研究行なった。具体的には以下の示す。1、融合タンパク質を用いた因子の検索:GATA-GT1、GATA-GT2と直接的に相互作用するタンパク質を調べるために、HA(ヘマグルチニン)タグを付けたGATA-GT1またはGATA-GT2との融合タンパク質を大腸菌で大量に調製した。そのれら融合タンパク質をプローブとして、胃粘膜組織より調製したcDNAライブラリーの発現系を用いて、相互作用するタンパク質の分離を行なっている。現在までに、2つの陽性クローンを分離できた。さらに、この方法によるクローンの分離を進めるとともに現在得ているクローンについても詳細に解析していく予定である。2、酵母two-hybrid法を用いた因子の検索:GATA-GT1、GATA-GT2と直接的に相互作用するタンパク質を調べるために、酵母GAL4のDNA結合ドメインとGATA-GT1又はGATA-GT2との融合タンパク質を酵母内で発現させ、それに結合しうる因子をtwo-hybrid法により検索した。現在、胃粘膜組織より調製したcDNAライブラリーの調製が終わり、スクリーニングを開始した。今後、このスクリーニングにより得たクローンをさらに解析してゆき、GATA-GT1、GATA-GT2の転写活性化の機構に関与している因子の役割を明らかにしていく。

今年的研究目的是寻找与转录因子 GATA-GT1 或 GATA-GT2 相互作用的蛋白质。具体如下所示。 1.使用融合蛋白寻找因子：为了研究与GATA-GT1和GATA-GT2直接相互作用的蛋白质，我们使用了带有HA（血凝素）标签的GATA-GT1或GATA-GT2的融合蛋白。使用大肠杆菌。使用这些融合蛋白作为探针和从胃粘膜组织制备的 cDNA 文库的表达系统，我们正在分离相互作用的蛋白。迄今为止，我们已经能够分离出两个阳性克隆。此外，我们计划使用该方法继续分离克隆，并对当前获得的克隆进行详细分析。 2.利用酵母二杂交法寻找因子：为了研究与GATA-GT1和GATA-GT2直接相互作用的蛋白质，我们研究了酵母GAL4的DNA结合域与GATA-GT1或GATA-之间的相互作用。我们在酵母中表达了GT2的融合蛋白，并使用双杂交方法寻找可以与其结合的因子。由胃粘膜组织制备的cDNA文库现已制备完成，并已开始筛选。今后，我们将进一步分析通过本次筛选获得的克隆，以阐明GATA-GT1和GATA-GT2转录激活机制中涉及的因子的作用。