転写調節因子GATA-GT1のcAMPに依存したユニークな応答と分子機構

转录调节因子GATA-GT1独特的cAMP依赖性反应和分子机制

基本信息

批准号：
08878098
负责人：
前田正知
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878098/
关键词：
転写調節因子 GATA cAMP プロテアソーム Aキナーゼ細胞内情報伝達 H^+K^+-ATPase 胃酸分泌酵素

项目摘要

胃プロトンポンプ(胃酸分泌酵素・H^+/K^+-ATPase)の転写制御機構を明らかにする研究の過程で発見したGATA・DNA結合蛋白質(GATA-GT1と-GT2)のうち、GATA-GT1はDNA結合領域にAキナーゼとともにCキナーゼによって共通にリン酸化され得る部位があるなど、複数の細胞内情報伝達経路との係わりが示唆されるため、興味深い転写調節因子である。本研究では、またGATA-GT1の細胞内制御様式を明らかにすることを目的とした。ラットのGATA-GT1をCHO-K1細胞に安定に発現させ、GATA-GT1の細胞内分布をカルボキシ末端側に対応する部位特異的抗体を用いてウエスタンブロッテイングにより調べると、すべて核に移行しており可溶性画分には認められなかった。一方、ジブチリルcAMPを培地に添加した場合に同様の分析を行うと、GATA-GT1は速やかに細胞内より(9時間)分解消失した。この変化は可逆的であり、培地からジブチリルcAMPを除くと、再びGATA-GT1は合成され、核に移行した。各種薬剤を添加しGATA-GT1の分解がどのように変動するかを検討し、以下のような結果を得た。Aキナーゼの阻害剤では分解が抑制され、細胞内cAMP濃度を上昇させるコレラ毒素によって分解が促進された。しかし一連のCキナーゼ系の昴進を促す試薬は影響を与えなかった。従って観察された現象は、細胞内cAMP濃度の上昇とそれに続くAキナーゼの活性化が関与していると考えらる。さらに各種プロテアーゼ阻害剤の効果を検討し、プロテアソームが関与している可能性を示した。

在研究过程中发现的GATA-DNA结合蛋白（GATA-GT1和-GT2）的含量澄清胃质子泵的转录调控机制（胃酸分泌酶，H^+/K^+-ATPase），GATA-GT1，GATA-GT1，GATA-GT1与gata-gt1相关，因为它与gata-gtne的关系是一个有趣的转录路径，因为ITS既有信号的途径，因为它是dera的途径，因为它是derak intrac的关系。是一个通常通过C激酶和激酶磷酸化的位点。这项研究还旨在阐明GATA-GT1的细胞内调节模式。大鼠GATA-GT1在CHO-K1细胞中稳定地表达，使用与羧基末端相对应的位点特异性抗体，通过蛋白质印迹检查了GATA-GT1的细胞内分布，并且发现所有GATA-GT1都迁移到核并在溶液中发现了所有GATA-GT1。另一方面，当将双苯乙烯营添加到培养基中时，进行了相同的分析，而GATA-GT1迅速从细胞内（9小时）丢失了分辨率。这种变化是可逆的，一旦从培养基中取出二丁酰基cAMP，GATA-GT1再次合成并转移到核。我们研究了GATA-GT1的降解如何通过添加各种药物而变化，并获得了以下结果。激酶的抑制剂抑制了降解，促进细胞内cAMP浓度的霍乱毒素促进了降解。但是，鼓励斯巴鲁·辛（Subaru Shin）的一系列基于C激酶的试剂无效。因此，观察到的现象被认为与细胞内cAMP浓度的增加以及随后激活激酶有关。此外，研究了各种蛋白酶抑制剂的作用，表明可能涉及蛋白酶体的可能性。