転写調節因子GATA-GT1のcAMPに依存したユニークな応答と分子機構

转录调节因子GATA-GT1独特的cAMP依赖性反应和分子机制

基本信息

批准号：
08878098
负责人：
前田正知
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878098/
关键词：
転写調節因子 GATA cAMP プロテアソーム Aキナーゼ細胞内情報伝達 H^+K^+-ATPase 胃酸分泌酵素

项目摘要

胃プロトンポンプ(胃酸分泌酵素・H^+/K^+-ATPase)の転写制御機構を明らかにする研究の過程で発見したGATA・DNA結合蛋白質(GATA-GT1と-GT2)のうち、GATA-GT1はDNA結合領域にAキナーゼとともにCキナーゼによって共通にリン酸化され得る部位があるなど、複数の細胞内情報伝達経路との係わりが示唆されるため、興味深い転写調節因子である。本研究では、またGATA-GT1の細胞内制御様式を明らかにすることを目的とした。ラットのGATA-GT1をCHO-K1細胞に安定に発現させ、GATA-GT1の細胞内分布をカルボキシ末端側に対応する部位特異的抗体を用いてウエスタンブロッテイングにより調べると、すべて核に移行しており可溶性画分には認められなかった。一方、ジブチリルcAMPを培地に添加した場合に同様の分析を行うと、GATA-GT1は速やかに細胞内より(9時間)分解消失した。この変化は可逆的であり、培地からジブチリルcAMPを除くと、再びGATA-GT1は合成され、核に移行した。各種薬剤を添加しGATA-GT1の分解がどのように変動するかを検討し、以下のような結果を得た。Aキナーゼの阻害剤では分解が抑制され、細胞内cAMP濃度を上昇させるコレラ毒素によって分解が促進された。しかし一連のCキナーゼ系の昴進を促す試薬は影響を与えなかった。従って観察された現象は、細胞内cAMP濃度の上昇とそれに続くAキナーゼの活性化が関与していると考えらる。さらに各種プロテアーゼ阻害剤の効果を検討し、プロテアソームが関与している可能性を示した。

GATA-GT1 是一种有趣的转录调节因子，因为它的 DNA 结合区有一个位点，通常可以被 A 激酶和 C 激酶磷酸化，这表明它参与多种细胞内信号转导途径。在本研究中，我们还旨在阐明GATA-GT1的细胞内调控模式。当大鼠 GATA-GT1 在 CHO-K1 细胞中稳定表达，并使用对应于羧基末端侧的位点特异性抗体通过蛋白质印迹检查 GATA-GT1 的细胞内分布时，所有 GATA-GT1 都易位到在可溶部分中没有观察到。另一方面，当在培养基中添加二丁酰cAMP时进行类似的分析时，GATA-GT1迅速降解并从细胞中消失（9小时）。这种变化是可逆的；当二丁酰 cAMP 从培养基中去除时，GATA-GT1 再次合成并转移到细胞核中。我们研究了添加各种药物后GATA-GT1的降解如何变化，并获得了以下结果。 A-激酶抑制剂抑制降解，霍乱毒素促进降解，霍乱毒素增加细胞内 cAMP 浓度。然而，一系列促进C-激酶系统激活的试剂却没有效果。因此，观察到的现象被认为与细胞内cAMP浓度增加以及随后A激酶的激活有关。此外，我们研究了各种蛋白酶抑制剂的作用，并表明蛋白酶体可能参与其中。