ポルフィロモナス・ジンジバリスによる歯肉溝滲出液好中球殺菌能の抑制機序の解析

牙龈卟啉单胞菌抑制龈沟渗出液中性粒细胞杀菌能力的机制分析

• 批准号: 07771740
• 负责人: 小林 哲夫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771740/
• 关键词: 歯肉溝滲出液; 好中球; ポルフィロモナス・ジンジバリス; 殺菌能; Fcγレセプター; mRNA

本研究の目的は、1-歯周炎患者末梢血(PB)並びに歯肉溝滲出液(GCF)好中球のFcγ-レセプターII,IIIの発現と殺菌能との関連性を検索すること、2-歯周病原菌の1つであるP.gingivalis(P.g.)が検出されたGCF中の好中球機能の変動と、その分子・遺伝子的検索を行うことである。1-についてはモノクロナール抗体、蛍光ビーズ及びDCFH-DAを用いてフローサイトメーターにて解析を行った。その結果、GCF好中球の貧食能及び活性酸素産生能は共にPB好中球と比較して有意に低下し、FcγレセプターII,IIIの発現についても、それぞれ有意に低下していた。更に、FcγR発現と貧食能の門では共に強い相関が認められた(FcγRII:r=0.499,,FcγRIII:r=0.669)。この2つのFcγR発現低下が蛋白合成段階で生じる現象か否かを検証するために、RT-PCR法を用いてGCF好中球のFcγRmRNA発現を解析したところ、PB好中球に比べて低下する傾向にあった。以上からGCF好中球の殺菌能はFcγRの発現低下に起因しており、不可逆的な反応であることが示唆された(第38回秋季日本歯周病学会総会にて発表)。2-についてはP.g.検出部位のスクリーニングに抗P.g.LPSモノクロナール抗体を用いる予定であったが、凝集の問題があり、An-IDENTシステムでの嫌気培養法を採用した。P.g.が検出された歯周ポケット内好中球の殺菌能は、非検出部位に比べて有意な低下が認められた(日本歯周病学会会誌1994年)。また、P.g.培養上清中にはFcγRII,RIIImRNA発現を低下させる因子が含まれることがRT-PCR法により判明した。以上よりP.g.検出部位では、好中球の生体防御機能が抑制され、歯周炎の病態悪化に密接に関連していることが示唆された。

本研究的目的是： 1- 探讨牙周炎患者外周血（PB）和龈沟液（GCF）中性粒细胞中 Fcγ 受体 II 和 III 的表达与其杀菌能力的关系；这项研究旨在对 GCF 中性粒细胞功能的变化进行分子和遗传学研究，其中检测到牙周病原体牙龈卟啉单胞菌 (P.g.)。 1- 使用流式细胞仪使用单克隆抗体、荧光珠和 DCFH-DA 进行分析。结果，与PB中性粒细胞相比，GCF中性粒细胞的吞噬能力和活性氧产生能力均显着降低，Fcγ受体II和III的表达也显着降低。此外，观察到FcγR表达与寡噬之间存在很强的相关性（FcγRII：r=0.499，FcγRIII：r=0.669）。为了验证这两种FcγR表达的减少是否是在蛋白质合成阶段发生的现象，我们使用RT-PCR分析了GCF中性粒细胞中的FcγR mRNA表达，发现与PB中性粒细胞相比是减少的。一种趋势。上述结果表明，GCF中性粒细胞的杀菌能力是由于FcγR表达减少所致，是一种不可逆反应（发表于第38届日本牙周病学会秋季年会）。对于2-，我们计划使用抗P.g.单克隆抗体来筛选P.g.，但存在凝集问题，因此我们采用了使用An-IDENT系统的厌氧培养方法。检测到 P.g 的牙周袋中中性粒细胞的杀菌能力显着低于未检测到的区域（日本牙周病学会杂志，1994）。此外，RT-PCR 显示 P.g. 培养物上清液中含有降低 FcγRII 和 RIII mRNA 表达的因子。由上可知，P.g检测部位的中性粒细胞的生物防御功能受到抑制，这与牙周炎的恶化密切相关。

项目成果

小林 哲夫: "Depressed Oxidative Function in Gingival Crevicular Polymorphonuclear Leukocytes from Porphyromonas gingivalis-detectable Periodontal Pockets." 日本歯周病学会会誌. 36. 745-756 (1994)

Tetsuo Kobayashi：“牙龈卟啉单胞菌可检测的牙周袋中牙龈沟多形核白细胞的氧化功能下降。”日本牙周病学会杂志 36. 745-756 (1994)