DNAトポイソメラーゼ I阻害抗癌剤に対する耐性機構の研究

DNA拓扑异构酶I抑制剂抗癌药物耐药机制研究

基本信息

批准号：
06770422
负责人：
藤原康弘
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770422/
关键词：
肺癌 DNAトポイソメラーゼ I 薬剤耐性 PCR-SSCP法高速液体クロマトグラフィー

项目摘要

1)トポイソメラーゼ|遺伝子点突然変異の検討:従来申請者らがPCR-SSCP法による培養細胞DNAトポイソメラーゼ|cDNAにおける点突然変異存在の有無の検討に用いてきたプライマーのみではRNA抽出のステップが必要で煩雑なため、まずgenomic DNAを用いてエクソン(1〜21)各々の点突然変異を検出できるような新たなプライマーの設計とその検討を行なった。ついで新規作成プライマー決定後、検体(気管支鏡採取あるいは剖検時採取)解析に移り、報告書作成時点で21症例(54検体、腫瘍部と正常肺組織あるいは末梢血白血球のペア)のトポイソメラーゼ|遺伝子エクソン12、15、20(培養細胞での点突然変異存在が報告されている部位)のPCR-SSCPを終了した。胸膜中皮腫の1例でエクソン12解析で腫瘍部、正常組織部共に異常バンドを検出し(Polymorphism)、塩基配列決定によりプライマーの設計上カバーせざるを得なかったイントロン11の1塩基置換(A-T)を確認したが、その他の20症例にDNAトポイソメラーゼ|遺伝子異常は認められなかった。今後も検体採取を継続し、対象症例50例にて最終解析を行なう予定である。2)塩酸イリノテカンの臨床薬理学的検討:従来の測定法では塩酸イリノテカン(CPT-11)とその活性代謝産物SN38を別々に測定しなければならず多検体の処理には限界があり、将来の臨床検査レベルへの導入に障害となると考えられたため、まずHPLCを用いたCPT-11/SN38同時測定系の確立を行なった。ついで測定系の妥当性確認後、本格的血中濃度測定に移り、報告書作成時点までに11症例(63コース)の薬物濃度測定を終了している。CPT-11のCmax(ng/ml)およびAUC(ng h/ml)は50、60、80(mg/m2)投与で各々520±87/2738±276、645±97/2922±558、944±158/4180±582であった。SN38のCmax(ng/ml)およびAUC(ng h/ml)は50、60、80(mg/m2)投与で各々10.9±2.6/81.0±12.4、12.5±4.4/103.2±45.7、16.2±4.0/139.7±41.1であった。薬動力学的検討ならびにLimited Sampling Modelの樹立は症例数が15〜20例以上になるまで実施不可能なため、症例集積を継続中である。

1）拓扑异构酶的研究|基因点突变：申请人先前已用于研究培养的细胞DNA拓扑酶中的点突变的存在或不存在|使用PCR-SSCP方法的cDNA，这是由RNA提取步骤复杂化的。因此，他们首先设计了新的底漆来使用基因组DNA检测每个外显子（1-21）的点突变。确定新创建的引物后，分析了样品（支气管镜检查或死灵），并在报告准备准备时终止了拓扑异构酶的PCR-SSCP |基因外显子12、15和20（报告了培养细胞中点突变的地点）。在一种胸膜间皮瘤的一种情况下，通过外显子12分析（多态性）在肿瘤和正常组织中都检测到异常条带，并且测序证实了内含子11的单个碱基替代（A-T），必须被引物设计覆盖，但没有DNA拓扑酶或Gene begne begnemasemerase或Gene Abnortorty obs of DNA tosemerase或Gentem normalitive。样本收集将来将继续进行，最终分析将对50名受试者进行。 2) Clinical pharmacological examination of irinotecan hydrochloride: In conventional measurement methods, irinotecan hydrochloride (CPT-11) and its active metabolite SN38 must be measured separately, and treatment of multiple specimens is limited, and it was thought to be an obstacle to future introduction to clinical testing levels, so we first established a simultaneous CPT-11/SN38 measurement system using HPLC。确认测量系统的有效性后，患者转移到了全尺度的血液浓度测量中，并且在准备报告时，已经完成了11例（63个课程）的药物浓度测量。 CPT-11的CMAX（NG/ML）和AUC（NG H/ML）分别为520±87/2738±276、645±97/2922±558，分别为944±158/4180±582，分别为50、60和80和80（MG/M2）。 SN38的CMAX（NG/ML）和AUC（NG H/ML）为10.9±2.6/81.0±12.4、12.5±4.4/103.2±45.7和16.2±4.0/139.7±41.1，分别为50、60、60、60和80（MG/M2）。直到案件数量达到15至20个或更多，因此无法进行药代动力学研究和建立有限的采样模型，因此案件的积累持续。