枯草菌のプロテアーゼ生産制御におけるproB遺伝子の機能に関する研究

proB基因控制枯草芽孢杆菌蛋白酶产生的功能研究

基本信息

批准号：
06760094
负责人：
小倉光雄
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760094/
关键词：
b.subtilis Alkaline protease two-component

项目摘要

1.proBのORFを含む、もしくは含まない各種サブクローニングプラスミドとORF内外にフレームシフト変異を持つプラスミドを作成し、各プラスミドのプロテアーゼ生産の増大効果を確かめる事によって、proB本体が、プロテアーゼ生産の増大効果を持っていることを確認した。また、染色体上のproBを破壊するとプロテアーゼ生産量が50%程度減少することから、通常の生理的状態で細胞のプロテアーゼ生産制御にproB遺伝子が必要であることが示唆された。2.現在知られているATP以外の低分子のリン酸供与体は、two-component系のregulatorタンパクをsensorタンパクの不存在下でリン酸化する。そこでproBの作用がsensorタンパクを要求するのか否かを検討するために、DegS-U系のsensorであるdegSを欠く宿主においてproBがプロテアーゼ生産促進効果を持つか調べた。具体的にはアルカリプロテアーゼ遺伝子(aprE)とlacZのfusionを、degSを欠き、多コピーproBを持つ宿主の染色体に導入し、β-ガラクトシダーゼ活性を測定した。その結果、プロテアーゼ生産の増大効果は観察されなかった。すなわち、proBの作用はsensorタンパクを要求する点で、過去の報告と異なっていた。3.proBは大腸菌ではすでにクローン化されており、proAとオペロンをなしていることが知られている。報告者は、申請時、完全長proBORFとproAORFのN末端部分を取得していた。そこで染色体walkingによって枯草菌のproAORFのC末端部分を取得し、枯草菌proBAオペロン(2.7kb)の塩基配列を決定した。

1。我们创建了含有或没有概率ORF和质粒的各种亚克隆质粒，其内部和外部的质粒质粒和质粒在ORF内部和外部进行了移动突变，并确认了增加每个质粒的蛋白酶产生的作用，并确认概率体具有增强蛋白酶产生的增强作用。此外，对染色体概率的破坏可将产生的蛋白酶量减少约50％，这表明该概率基因对于在正常生理状态下调节细胞中的蛋白酶的产生是必要的。 2。在没有传感器蛋白的情况下，当前已知的ATP以外的小分子磷酸盐供体（目前已知）磷酸化的两种组件调节蛋白。因此，为了研究概率的效果是否需要传感器蛋白，我们研究了概率是否具有促进缺乏DEGS的宿主的蛋白酶产生的作用，DEGS是DEGS-U系统的传感器。具体而言，将碱性蛋白酶基因（APRE）和LACZ的融合引入了缺乏DEG并具有多拷贝概率的宿主的染色体中，并测量了β-半乳糖苷酶活性。结果，未观察到对蛋白酶产生的影响。换句话说，概率的效果与以前的报道不同，因为它需要传感器蛋白。 3。概率已经被克隆到大肠杆菌中，并且已知与ProA形成操纵子。记者在应用时获得了ProAF的全长Proborf和N末端部分。因此，枯草芽孢杆菌的C末端部分是通过染色体行走获得的，并确定了枯草芽孢杆菌的基础序列（2.7 kb）。