スライスパッチクランプ記録法による虚血性神経細胞死のメカニズムに関する研究

切片膜片钳记录法研究缺血性神经元死亡机制

基本信息

批准号：
06780679
负责人：
坪川宏
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は以下の2項目について研究を行い、成果を発表した。1.虚血負荷後の海馬CA1錘体細胞で記録されるグルタミン酸受容体電流の特性について虚血後のスナネズミ海馬スライス標本を用いてCA1錘体細胞よりホールセルおよびアウトサイド・アウトパッチクランプ記録を行ない、グルタミン酸受容体の各サブタイプのアゴニストを投与して惹起される電流について定量的に解析し健常細胞と比較した。その結果虚血負荷後の錘体細胞では非NMDA型受容体を介する電流のコンダクタンスは健常細胞より大きく、NMDA型受容体を介する電流のコンダクタンスは小さいことが解り、昨年報告したシナプス後電流の特性の違いはシナプス後膜のグルタミン酸受容体の性質の違いに起因することが示唆された。さらにアウトサイド・アウトパッチクランプ記録からグルタミン酸受容体各サブタイプの単一チャネル・コンダクタンスも健常細胞と異なっていることが明らかになり、受容体タンパクのサブ・ユニット構成の違いが示唆された。2.海馬CA1錘体細胞で記録されるグルタミン酸受容体電流に及ぼすクモ毒投与の効果スナネズミ海馬スライス標本を用いて、CA1錘体細胞よりホールセル記録および単一チャネル記録を行なって興奮性シナプス後電流(EPSC)およびグルタミン酸受容体の各サブタイプのアゴニストを投与して惹起される電流を記録し、それらに対するクモ毒(JSTXとそのアナログ)の投与の効果を検討した。その結果JSTXアナログは非NMDA型受容体チャネルを流れる電流の一部を濃度依存性かつ可逆的にブロックすることが解った。虚血負荷後の海馬CA1錘体細胞で記録されるグルタミン酸受容体電流に対して同様の実験を行ったところ、非NMDA型受容体チャネルを流れる電流をより低濃度でブロックした。これらの結果から非NMDA型受容体にはJSTXアナログによりブロックされる型とされない型があり、虚血負荷後の海馬CA1錘体細胞では前者の割合が大きいことが示唆された。

今年，我们对以下两个项目进行了研究，并提出了结果。 1. The characteristics of glutamate receptor current recorded in hippocampal CA1 pyramidal cells after ischemic loading were performed whole cell and outside-out patch clamp recordings from CA1 pyramidal cells using sliced specimens after ischemia, and the currents elicited by administering agonists of each subtype of glutamate receptor were quantitatively analyzed and compared with healthy cells.结果，发现缺血性负荷后，由非NMDA型受体介导的电流的电导率大于健康细胞的电导，并且由NMDA型受体介导的电流介导的电流较小，这表明上一年报告的质量差异是在Glutighties prompers中差异的差异。此外，外部分支钳记录显示，每个谷氨酸受体亚型的单通道电导与健康细胞的单通道电导率不同，这表明受体蛋白的亚基组成差异。 2。蜘蛛毒液对海马CA1锥体细胞中记录的谷氨酸受体电流的影响。使用来自CA1锥体细胞的全细胞和单个通道记录，我们对兴奋性突触后电流（EPSC）和谷氨酸受体诱导的每种亚型的每个亚型进行了全细胞记录，并记录了蜘蛛毒液（JSTX及其模拟）的影响。结果表明，JSTX类似物阻止了流经非NMDA受体通道的电流的浓度依赖性和可逆浓度依赖性部分。缺血负荷后，对在海马CA1锥体细胞中记录的谷氨酸受体电流进行了类似的实验，并以较低的浓度阻断了流过非NMDA受体通道的电流。这些结果表明，非NMDA型受体可能会被JSTX类似物阻止，并且缺血性载荷后，前者比例在海马CA1锥体细胞中很大。