スライスパッチクランプ記録法による虚血性神経細胞死のメカニズムに関する研究

切片膜片钳记录法研究缺血性神经元死亡机制

基本信息

批准号：
05780601
负责人：
坪川宏
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は以下の2項目について研究を行い、成果を発表した。1.虚血負荷後の海馬CA1錘体細胞で記録される興奮性シナプス後電流(EPSC)の特性について虚血後のスナネズミ海馬スライス標本を用いてCAI錘体細胞よりホールセル記録を行い、EPSCのカイネティクスや構成電流成分について健常細胞と比較し定量的に解析した。その結果虚血負荷後の錘体細胞では時間経過の長いEPSCが記録され、その成分の主体はグルタミン酸受容体サブタイプの内の非NMDA型受容体を介する電流であることが解った。そらにその時間経過は細胞外液のCa^<2+>濃度を下げると減少することから、虚血後の細胞では非NMDA型受容体の活性化が細胞外からの異常なCa^<2+>流入を促している可能性が示唆された。2.虚血性遅発性神経細胞死へのイノシトールリン脂質代謝系の関与についてホールセル記録法の利点を生かし、虚血後のスナネズミ海馬スライス標本を用いて細胞内に種々の高分子物質を注入し膜電流の変化を解析した。フォスファチジルイノトシール2リン酸に対する抗体を注入したところ、虚血負荷後の細胞に特徴的な興奮性入力による不可逆的な脱分極を防ぐことが出来た。同様の方法で細胞内ヘイノシトール4リン酸を注入すると脱分極反応は促進され、イノシトール3リン酸から4リン酸への反応を触媒する酸素に対する抗体を注入すると脱分極は起こらなかった。以上の結果から細胞死の過程でイノシトール4リン酸が重要な役割を果たしていることが明らかになった。

今年，我们对以下两个项目进行了研究，并提出了结果。 1。在缺血后，在缺血载荷后，在缺血负荷后记录的兴奋性突触后电流（EPSC）的全细胞记录，在缺血后进行缺血性载荷，并在健康细胞中定量分析EPSC的动力学和组成型电流成分。结果，缺血性负荷后，在肺部细胞中记录了长期EPSC，并且发现该成分的主要成分是由谷氨酸受体亚型内的非NMDA型受体介导的电流。实际上，当降低细胞外液中Ca^<2+>的浓度降低时，时间过程会降低，这表明非NMDA型受体的激活可能刺激缺血细胞后细胞中外部从外部流入异常的Ca^<2+>。 2。利用整个细胞记录方法，将肌醇磷脂代谢涉及缺血性慢性神经元死亡中，在缺血后，使用沙鼠海马切片将各种聚合物物质注入细胞中，以分析膜电流的变化。注射针对磷脂酰二磷酸磷酸磷酸磷酸的抗体可阻止缺血性负荷后细胞的兴奋性输入特征导致不可逆的去极化。以类似的方式注射细胞内己醇4-磷酸盐，促进了去极化反应，并注入针对氧抗体的抗体，从而催化从3磷酸肌醇到4磷酸的反应并未导致去极化。以上结果表明，肌醇4磷酸盐在细胞死亡过程中起重要作用。