小児の齲蝕感受性と獲得被膜構成タンパク質の特性に関する研究

儿童龋齿易感性及获得性荚膜蛋白特性研究

• 批准号: 06772048
• 负责人: 高橋 智秀
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tsurumi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772048/
• 关键词: 酸処理エナメル質; 獲得被膜; アミノ酸分析

歯磨剤による清掃直後、または修復処置に伴なう酸処理直後の歯表面には、唾液中のタンパク質が特異的に吸着して獲得被膜が形成される。これらの唾液タンパク質にはいくつかの種類があり、歯面との吸着状態に強度の差があることをこれまでの研究で示してきた。現在小児の獲得被膜の個体差や、齲蝕感受性との関連についての研究を計画している。しかし、大人であっても形成された時間が分っている獲得被膜だけを、分析可能な量だけ1口腔から採取したり、直接ヒトの口腔内から唾液や血液を混入させずに採取することは非常に困難である。今回の研究では、複数の被検者について、各被験者から計測可能な量の被膜を効率良く実験的に形成・採取する方法を考案した。被験者は歯磨剤を用いずに歯磨きし、超純水で洗口後、吸引装置で舌下から貯留唾液を30ml採取した。唾液採取には30〜150分を要した。細菌や食物を除去するために、唾液は15,000rpmで10分間の遠心分離を行ない、上清のみを使用した。一方、同一規格(10×6×2mm)で作製したウシエナメル質ブロックの表面を30秒間酸処理し、ディスポ-ザブルの蓋付きプラスチックシャーレに20個接着し、これに上清を加え、発砲スチロールの氷上に置き、2時間振盪して被膜を形成した。2時間後にエナメル表面質を充分水洗・乾燥し、被膜をスケーラーで掻き取って採取した。これを6規定塩酸で24時間(110℃)加水分解した後、日立L-8500型高速アミノ酸分析装置で分析した。その結果、6人の個々の被検者の唾液について20歯面から採取し計測できた被膜試料は約7,000〜9,000ngであり、この方法によって充分計測可能な量の被膜を採取できることが分った。またこれらの採取被膜試料は、グリシン、グルタミン酸、プロリンの多い高プロリンタンパク質であることが確認され、これまでの研究結果とも一致している。

牙齿的表面被唾液在用牙齿固定后立即被唾液吸附，或者在酸处理后立即与修复程序结合使用，并形成获得的涂层。先前的研究表明，这些唾液蛋白有几种类型，并且吸附状态的强度与牙齿表面存在差异。目前，我们计划研究儿童获得的胶囊及其与心易感性的相关性的个体差异。但是，只能从一个可以分析的数量中收集获得的胶囊，即使是成年人，即使是成年人，即使是成年人也很难，或者直接从人的口腔中收集唾液和血液而不混合唾液或血液。在这项研究中，我们设计了一种方法，用于有效，实验地形成并收集每个受试者的可测量涂层。受试者在不使用牙齿的情况下刷牙，用超纯水洗净嘴，然后使用吸气装置从舌下收集30毫升的唾液。唾液收集需要30到150分钟。为了去除细菌和食物，将唾液以15,000 rpm离心10分钟，并且单独使用上清液。同时，将在相同标准（10 x 6 x 2 mm）制备的牛搪瓷块的表面进行酸处理30秒，并将20片粘在带盖的一次性塑料培养皿上，并将上清液添加到表面上，并将其放在冰上，用Styrofoam放置在冰上，并摇晃2小时以形成涂料。 2小时后，用水彻底洗涤牙釉质表面，并用缩放器将涂层刮掉并收集。将其用6N盐酸水解24小时（110°C），然后使用日立L-8500高速氨基酸分析仪进行分析。结果，发现可以通过对六个单个受试者的唾液的20个牙齿表面进行测量的涂料样品量约为7,000至9,000 ng，并且可以使用此方法收集足够可测量的涂层。此外，这些取样的涂层已被证实是富含甘氨酸，谷氨酸和脯氨酸的高生殖蛋白，这与先前的研究结果一致。