小児の獲得被膜構成タンパク質に関する研究

儿童获得性胶囊成分蛋白的研究

• 批准号: 09771878
• 负责人: 高橋 智秀
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Tsurumi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771878/
• 关键词: 酸処理エナメル質; 再石灰化; 獲得被膜; アミノ酸組成; 全唾液

外来で診療中の小児の口腔から6〜8mlの貯溜全唾液を遠心分離用のチューブに直接採取し、細菌や食物残渣を除去するために15,000rpmで10分間の遠心分離を行い、上清のみを回収した。また、ウシの下顎切歯から作製した同一規格のエナメル質ブロック表面を30秒間60%リン酸で酸処理した後水洗・乾燥した。各唾液試料1つにに対して10個のエナメル質ブロックを、φ35mm×H10mmのディスポーザブルの蓋付シャーレに並べて固定し、4mlの唾液上清を加え、室温で2時間振盪して獲得被膜を形成した。2時間後にエナメル質表面を充分水洗・乾燥し、獲得被膜をスケーラーで採取して水解管に入れ、凍結乾燥した。これに6規定塩酸を加えて脱気した後、減圧封管し、24時間加水分解した後、日立L-8500形高速アミノ酸分析計で分析した。また、100μlの唾液を凍結乾燥し、この5μl相当を同時に分析した。小児歯科外来での齲蝕治療には必ずラバーダム防湿が行われており、これによって1回の診療時間内で患児に負担をかけることなく必要な量の唾液が採取できた。合計17人の患児(3歳6ヶ月〜13歳7ヶ月、平均7歳9ヶ月)について分析を行った結果、獲得被膜のアミノ酸組成では、グルタミン酸、グリシン、プロリンが多かった。これは、貯溜全唾液のアミノ酸概形とは明らかに異なる組成比を有するタンパク質によって獲得被膜が構成されており、年齢、性別、全唾液のタンパク質濃度に関わりなくほぼ一定の組成比となることを示していた。この結果は以前に行った成人被験者の唾液から形成・採取した獲得被膜のデータと近似していた。10歯面から採取した獲得被膜のアミノ酸量は約5.4〜26.2μg(平均11.4μg)であった。また、貯溜全唾液を分析した結果、唾液1ml当たりのアミノ酸量は約240〜1790μg(平均1147μg)であった。

直接从门诊治疗儿童口腔中收集6～8ml积聚的全唾液至离心管中，15000rpm离心10分钟，除去细菌和食物残渣，仅回收上清液。另外，将牛下颌切牙制成的相同标准的釉质块的表面用60％磷酸酸处理30秒，然后水洗并干燥。将每个唾液样本的10个牙釉质块排列并固定在直径35mm、高10mm的一次性带盖培养皿中，加入4ml唾液上清液，在室温下摇动2小时，形成牙釉质块。收购了电影。 2小时后，用水充分洗涤釉质表面并干燥，用定标器收集所得膜，置于水解管中，并冷冻干燥。加入6N盐酸并脱气后，减压密封管并水解24小时，随后使用日立L-8500高速氨基酸分析仪进行分析。另外，将100μl唾液冷冻干燥，并同时分析5μl的当量。儿童牙科门诊常使用防潮橡皮障进行龋齿治疗，这样可以在一次咨询过程中收集必要量的唾液，而不会给患者带来任何负担。对总共 17 名受影响儿童（3 岁 6 个月至 13 岁 7 个月，平均年龄 7 岁 9 个月）的分析显示，获得的胶囊的氨基酸成分富含谷氨酸、甘氨酸和脯氨酸。这表明获得的胶囊由其组成比例明显不同于储存的全唾液的一般氨基酸谱的蛋白质组成，并且无论年龄、性别和全唾液的蛋白质浓度如何，组成比例几乎保持恒定。它正在展示。该结果与之前从成人受试者唾液中形成和收集的胶囊获得的数据相似。 10颗牙齿表面采集的胶囊氨基酸含量约为5.4-26.2μg（平均11.4μg）。另外，对所保存的全唾液进行分析的结果，每1ml唾液的氨基酸量约为240～1790μg(平均1147μg)。