32kDaエナメリンの構造

32kDa 牙釉质的结构

基本信息

批准号：
06771648
负责人：
山越康雄
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ブタの永久歯歯胚より削り集めた幼若エナメル質から抽出され、HPLCによって精製された32kDaエナメリンは、SDS電気泳動時のStains allに対する染色性から、リン酸化タンパク質または糖タンパク質であることが示唆される。このタンパク質を化学的・酵素的に分解して得られた断片ペプチドのアミノ酸配列分析から、32kDaエナメリンは103個のアミノ酸から構成されており、このうち、アミノ末端領域の^<18>Serと^<43>Serにはリン酸基が、また、カルボキシ末端領域の^<72>Asnと^<79>Asnと^<91>Asnには糖鎖が結合していることが判明した。糖鎖構造の解明は、二次元糖鎖マップ法によって行った。精製した32kDaエナメリンから酵素的に糖鎖を遊離させ、ピリジルアミノ化(PA化)後、HPLCを行うことによって8種類のPA化オリゴ糖鎖が分離・精製された。各PA化オリゴ糖鎖を連続的にエキソグリコシダーゼ消化を行ない、糖鎖構造の解析を行った結果、それらのアシアロコア構造はバイアンテナ型とトリアンテナ型の2種類に大別された。また、シアル酸の結合様式と結合位置の違いによって、5種類のバイアンテナ型と3種類のトリアンテナ型が存在することが判明した。32kDaエナメリン中のアスパラギン結合型オリゴ糖鎖の結合可能部位は3ヶ所だけなので、このような糖鎖の多様性が何に起因しているのかを解明することが今後の課題となる。

32 kDa搪瓷素，从幼虫搪瓷中提取并用HPLC纯化，这表明它是一种磷酸化的蛋白质或糖蛋白，因为它的染色特性在SDS电泳上均具有污渍。从化学和酶上分解该蛋白的碎片肽的氨基酸序列分析中，发现32 kDa的烯象蛋白由103个氨基酸组成，其中磷酸基团与 ^<18> Ser和 ^<43>在氨基末端区域和糖链中绑定到 ^<71> n1 and ^72 as ^72 as ^72 as ^72 as ^79 aSN <79>羧基终端区域。通过二维聚糖图法阐明了聚糖结构。糖链从纯化的32 kDa搪瓷，吡啶基胺化（PA）中释放，然后进行HPLC以分离和纯化的八种含PA的含PA的寡糖链。用外糖苷酶连续消化每个PA形成的寡糖链，并分析聚糖结构，并将Assialocore结构大致分为两种类型：Bi-Antenna和Tri-Antenna。此外，发现根据结合模式和唾液酸的结合位置，有五种类型的BI-ANTENNA类型和三种类型的Tri-Antenna类型。由于在32KDA enameline中只有三个可能的地表寡糖链的站点，因此未来的挑战将是阐明这种糖链多样性的原因是什么。