32kDaエナメリンの構造

32kDa 牙釉质的结构

基本信息

批准号：
06771648
负责人：
山越康雄
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ブタの永久歯歯胚より削り集めた幼若エナメル質から抽出され、HPLCによって精製された32kDaエナメリンは、SDS電気泳動時のStains allに対する染色性から、リン酸化タンパク質または糖タンパク質であることが示唆される。このタンパク質を化学的・酵素的に分解して得られた断片ペプチドのアミノ酸配列分析から、32kDaエナメリンは103個のアミノ酸から構成されており、このうち、アミノ末端領域の^<18>Serと^<43>Serにはリン酸基が、また、カルボキシ末端領域の^<72>Asnと^<79>Asnと^<91>Asnには糖鎖が結合していることが判明した。糖鎖構造の解明は、二次元糖鎖マップ法によって行った。精製した32kDaエナメリンから酵素的に糖鎖を遊離させ、ピリジルアミノ化(PA化)後、HPLCを行うことによって8種類のPA化オリゴ糖鎖が分離・精製された。各PA化オリゴ糖鎖を連続的にエキソグリコシダーゼ消化を行ない、糖鎖構造の解析を行った結果、それらのアシアロコア構造はバイアンテナ型とトリアンテナ型の2種類に大別された。また、シアル酸の結合様式と結合位置の違いによって、5種類のバイアンテナ型と3種類のトリアンテナ型が存在することが判明した。32kDaエナメリン中のアスパラギン結合型オリゴ糖鎖の結合可能部位は3ヶ所だけなので、このような糖鎖の多様性が何に起因しているのかを解明することが今後の課題となる。

从猪恒牙牙胚刮取的幼年牙釉质中提取并通过 HPLC 纯化的 32kDa 牙釉质基于 SDS 电泳期间的染色结果表明是磷酸化蛋白质或糖蛋白。通过对该蛋白质进行化学酶解而获得的片段肽的氨基酸序列分析表明，32kDa牙釉质由103个氨基酸组成，其中在氨基末端区域具有^ 18 Ser和^ 43 Ser。磷酸基团，并且糖链与羧基末端区域中的^ 72 Asn、^ 79 Asn和^ 91 Asn结合。使用二维糖链作图方法阐明了糖链结构。从纯化的 32kDa 牙釉质中酶促释放糖链，并在吡啶胺化 (PA) 后，通过 HPLC 分离和纯化八种 PA 形成的寡糖链。通过外切糖苷酶连续消化各PA寡糖链并分析糖链结构，将脱唾液酸核心结构分为两种类型：双触角型和三触角型。此外，还发现根据唾液酸的键合方式和键合位置，存在五种双触角型和三种三触角型。由于 32kDa 牙釉质中天冬酰胺连接的寡糖链只有三个可能的结合位点，因此未来的挑战将是阐明导致糖链多样性的原因。