ブタ幼若エナメル質に含まれるシアリダーゼの精製とシアリル糖鎖の機能について

仔猪牙釉质唾液酸酶的纯化及唾液酸糖链的功能

基本信息

批准号：
09771556
负责人：
山越康雄
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

1. ザイモグラフィーによるエナメルシアリダーゼの検出幼若エナメル質からリン酸緩衝液(pH7.4)抽出にて得られた粗酵素試料を用いてムチンを基質としたザイモグラフィーを行った結果、分子量約24,000付近に活性バンドが認められた。さらにプロテアーゼと区別するために、プロアーゼ阻害剤及びシアリダーゼ阻害剤を用いて同様の実験を行った結果、シアリダーゼ阻害剤である過マンガン酸カリウム、硫酸銅、DDNを含んだそれぞれの緩衝液に反応させると、活性バンドが消失したことより、この24kDaの活性バンドがシアリダーゼであることが示唆された。2. 高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によるシアリダーゼの同定実験32kDaエナメリンからN型糖鎖を酵素的に遊離させ、2-ピリジルアミンで蛍光標識した、PA化糖鎖を用いて、上記粗酵素試料と反応させて、反応前後での逆相HPLCの溶出パターンを比較した結果、モノシアロ糖鎖からアシアロ糖鎖への変化が認められたことより、シアリダーゼの存在が確認された。また、この実験では、α2-6結合よりもα2-3結合でガラクトースに結合しているシアル酸の方が、より早く遊離することもわかった。今後、エナメルシアリダーゼの性質及び32kDaエナメリンの前駆体である89kDaエナメリンに対する作用についても検討しなければならないが、今回の実験により、幼若エナメル質中に含まれるシアリダーゼが量的にかなり少ないことと約15日で失活することも判明したので、これらの点もふまえた実験条件や操作方法の改良が必要とされる。

1。Zaimography恢复了魔法酶，是从磷酸元素的年轻搪瓷（PH7.4）进行的，这是由于基于粘蛋白的ZIM摄影而使用通过提取的粗酶样品基于粘膜的结果，分子量约为24,000活动带被认可在附近。为了进一步与蛋白质区分开，使用pro -speech抑制剂和乳木糖酶抑制剂进行了相同的实验，以及雪茄酸钾，硫酸铜和ddn是cyleidase抑制剂，将其反应于每个缓冲液活跃带中的24KDA活性频带是Carydase。 2。通过高速液相色谱（HPLC）对CYALIDASE进行的设备实验32KDA酶是酶的，并使用PA糖链使用上述粗糙酶样品，将荧光标记为2-吡啶酰胺。反应前后反向相HPLC的洗脱模式，由于识别从单糖 - 苏格链到亚物质糖链的变化，确认了cialidase的存在。在该实验中，还发现与α2-3键键合的唾液酸比α2-6键要快。将来，有必要检查搪瓷硅树脂酶的特性以及对89KDA搪瓷的影响，这是32KDA搪瓷素的前体，但是该实验大大降低了幼年中包含的硫化含量。在15天的时间里，有必要根据这些点改善实验条件和操作方法。