ブタ32kDaエナメリン結合糖鎖の結合部位による糖鎖の多様性

聚糖的多样性取决于猪 32kDa 釉质连接聚糖的结合位点

基本信息

批准号：
08771628
负责人：
山越康雄
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.固体別・歯種別糖鎖分析12匹のブタの永久大臼歯及び永久切歯歯胚から固体別及び歯種別に集められた幼若エナメル質から抽出され、逆相HPLCによって精製された32kDaエナメリンについてグリコペプチダーゼFを用いて糖鎖を遊離させ、PA化を行い、糖鎖分析を行った結果、既に判明している32kDaエナメリンに結合しているN型糖鎖のHPLCによる溶出パターンと同様に、全ての試料から8種類の糖鎖が検出された。これら糖鎖については、固体間及び歯種間でバイアンテナ型とトリアンテナ型の糖鎖の比に有意差が見られた。2.糖鎖結合部位糖鎖分析30匹以上のブタの永久大臼歯歯胚から上記方法で精製された32kDaエナメリンにV8プロテアーゼとプロナーゼを作用させ、逆相HPLCを行うことによって、糖鎖結合部位を1箇所ずつ含む3つの糖ペプチドが得られた。これらについて上記方法で糖鎖の遊離及びPA化を行い、糖鎖分析を行った結果、^<72>Asn及び^<79>Asnの結合部位からはそれぞれ5種類と2種類のバイアンテナ型のPA化糖鎖が、また^<91>Asnの結合部位からは3種類のトリアンテナ型のPA化糖鎖が検出された。さらにシアリダーゼ処理の結果、それぞれの糖鎖は共通のアシアロコア構造を有していることが判明した。また、各糖ペプチドの糖鎖あたりの結合シアル酸数は^<79>Asnに結合している糖鎖において著しく減少していた。以上のことより、糖鎖の多様性は歯種による違い、または個体差で生じるのではなく、3箇所の糖鎖結合部位に結合している糖鎖のシアル酸の結合様式と結合位置の違いによって生じることが判明した。また、シアル酸の分解は、3箇所の糖鎖で均一に行われていないことが示唆された。この脱シアル化が幼若エナメル質中に存在するかも知れないシアリダーゼによるものかどうかを解明することが今後の課題となる。

1. 按个体和牙齿类型从 12 头猪的恒磨牙和恒切牙的牙胚中收集的幼年牙釉质中提取的 32kDa 聚糖，并通过反相 HPLC 纯化。使用ZeF释放糖链，进行PA转化，并进行糖链分析，结果在样品中检测到了8种糖链。对于这些糖链，在个体和牙齿类型之间观察到二触角型和三触角型糖链的比例存在显着差异。 2.糖链结合位点聚糖分析将通过上述方法从30多头猪的恒磨牙牙胚中纯化的32kDa牙釉质用V8蛋白酶和链霉蛋白酶处理，通过反相HPLC分析含1个的3个糖肽。每个网站都获得了。使用上述方法释放和PA形成这些糖链并进行聚糖分析的结果，我们发现从^<72>Asn和^<79>Asn的结合位点检测到5种和2种双触角，分别从^ 91 Asn的结合位点检测到三种类型的三触角型PA-糖基化糖链。此外，作为唾液酸酶处理的结果，表明每个糖链具有共同的脱唾液酸核心结构。另外，在与79 Asn结合的糖链中，每种糖肽的每个糖链结合的唾液酸的数量显着减少。由上可见，糖链的多样性不是由牙齿类型的差异或个体差异引起的，而是由与三个糖链结合位点结合的糖链的唾液酸的结合方式和结合位置的差异引起的。发现这是由此外，这表明唾液酸的分解在三个糖链之间并不均匀地进行。未来的挑战将是阐明这种去唾液酸化是否是由于年轻牙釉质中可能存在的唾液酸酶所致。