脊損ラット膀胱平滑筋の自律神経受容体における細胞内情報伝達機構に関する研究

脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌自主神经受体细胞内信息传递机制研究

基本信息

批准号：
06771280
负责人：
三股浩光
金额：
$ 0.58万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771280/
关键词：
膀胱平滑筋ムスカリン受容体イノシトールリン脂質

项目摘要

〈目的〉ラット膀胱平滑筋のムスカリン受容体刺激によるイノシトールリン脂質系の情報伝達機構について検討した.〈方法〉10週齢のSprague-Dawleyラットの膀胱平滑筋を細切し,Krebs-Hansleit液中でインキュベートして,carbachol刺激を行った.20%perchloric acidで反応を止め,除蛋白後にIP_3を牛副腎のbinding proteinを用いて[^3H]IP_3との競合法で測定した.各種ムスカリン受容体subtypeのantagonistの影響については,膀胱平滑筋細片を[^3H]myo-inositolと3時間インキュベートし,洗浄後に10mMLiCl存在下でcarbachol刺激を行った.chloroform/methanol法で反応を止め,Dowex AG1カラムでtotal IPを抽出して液体シンチレーションカウンターで測定した.〈結果〉1)IP_3はcarbachol刺激で約20秒後に最高値に達して30秒後には基礎値に戻った.2)carbacholに対するEC_<50>は約5mMであった.3)M1 receptorのantagonistであるPirenzepineでは10^<-5>M以上の高濃度ではじめてIP_3産生が抑制され,M2 receptor antagonistのMethoctramineでは10^<-4>Mの高濃度でも抑制はみられなかった.AtropineとM3 receptor antagonistである4-DAMPでは10^<-7>Mの低濃度でIP_3産生が完全に抑制された.Atropine,4-DAMPおよびPirenzepineのIC_<50>はそれぞれ1.5x10^<-8>M,2.5x10^<-8>Mおよび7.2x10^<-6>Mであった.〈考察〉平滑筋細胞では受容体刺激によってまずIP_3が産生され,ついで細胞内Ca濃度が上昇して収縮応答がおこるとされている.ラット膀胱平滑筋ではM3 receptorがIP_3産生に関与して収縮を惹起するものと考えられたが,IP_3は30秒以内に刺激前値に戻るため、収縮の持続相には関与しないものと考えられた.

目的：我们通过刺激大鼠膀胱平滑肌中的毒蕈碱受体来调查肌醇磷脂系统信号传导的机制。方法：切碎了10周龄的Sprague-Dawley大鼠膀胱平滑肌切片，切碎，在Krebs-Hansleit的液体，刺激的卡巴纳果中切碎，在Krebs-Hansleit的液体中进行培养。用20％的高氯酸停止反应，去除脱蛋白后，使用牛肾上腺肾上腺的结合蛋白以竞争方式测量IP_3。关于各种毒蕈碱受体亚型的拮抗剂的作用，将膀胱平滑肌碎片与[^3H]肌醇醇孵育3小时，在洗涤后，在10 mmlicl存在的情况下洗涤后，卡尔巴乔刺激了。反应通过氯仿/甲烷法停止，并通过陶氏停止反应。在AG1柱上提取总IP，并使用液体闪烁计数器进行测量。结果1）IP_3在Carbachol刺激下大约20秒后达到了最高值，并在30秒后返回到基础值。 2）Carbachol的EC_ <50>约为5毫米。 3）IP_3的产生首次被抑制，高浓度为10^<-5> m或更高，即使在高浓度为10^<-4> m的高浓度下，M2受体拮抗剂甲胺也没有抑制作用。阿托品和M3受体IP_3的产生在4-DAMP，拮抗剂和IC_ <50>的低浓度为10^<-7> m的情况下被完全抑制。 <讨论>在平滑肌细胞中，IP_3首先是由受体刺激产生的，细胞内Ca浓度增加，从而导致收缩反应。在大鼠膀胱平滑肌中，人们认为参与IP_3产生并引起收缩的M3受体，但是IP_3在30秒内返回到预刺激值，因此认为它与持续收缩相无关。