卵母細胞受容体発現モデルを用いたイノシトール燐酸情報伝達系に対する麻酔薬の作用

使用卵母细胞受体表达模型研究麻醉剂对磷酸肌醇信号系统的影响

• 批准号: 06771176
• 负责人: 岡村 篤
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771176/
• 关键词: NMDA; TPA; Oocyte; Anesthetic

卵母細胞による受容体の発現を得るため、ラット大脳より、mRNAキットにより1mg/mlのPoly(A)+mRNAを抽出した。アフリカツメガエル卵母細胞をcollagenase(15mg/ml)で120分処理したものにmicroinjecterを用いて50ngのPoly(A)+mRNAを注入した。mRNA注入後の卵母細胞は2日間培養した後、電気生理学的実験に用いた。麻酔薬による受容体応答の変化は2電極膜電位固定法で行った。電位固定に膜電位固定増幅器(日本光電、CEZ-1200)を用いた。記録には14bit A/D変換器(TEAC,9351)に接続したコンピュータ(HP,340CH)を用いた。ソレノイドバルブを用いた薬物急速投与法(Y-tube法)によって中枢神経系における興奮性の伝達物質であるN-methyl-D-aspartate(NMDA)を1,50,100μMの濃度で投与し、コントロールのdose-response curveを得た。次に、NMDA誘発電流を増強するprotein kinase-C(PKC)のアクチベータである12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)を前処置するとNMDAによる誘発電流は増強され、その程度はNMDAの濃度に比例した。次に揮発性麻酔薬であるメトキシフルランを灌流液中に溶解し投与し、TPAによるNMDA誘発電流の増強がどの様に影響されるかを解析しようとしたが、十分なデータを収集できなかった。

为了获得卵母细胞的受体表达，使用 mRNA 试剂盒从大鼠大脑中提取 1 mg/ml Poly(A)+mRNA。用胶原酶 (15 mg/ml) 处理非洲爪蟾卵母细胞 120 分钟，然后使用显微注射器注射 50 ng Poly(A)+mRNA。注射mRNA后的卵母细胞培养2天，然后用于电生理实验。使用两电极膜电压钳法研究了麻醉剂引起的受体反应的变化。使用膜电位固定放大器（Nihon Kohden，CEZ-1200）来固定电位。连接到 14 位 A/D 转换器（TEAC，9351）的计算机（HP，340CH）用于记录。 N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 是中枢神经系统中的兴奋性递质，通过使用电磁阀快速给药（Y 管法），以 1、50 和 100 μM 的浓度给药。得到响应曲线。接下来，用增强 NMDA 诱导电流的蛋白激酶 C (PKC) 激活剂 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA) 进行预处理，增强 NMDA 诱导电流，其程度由NMDA 浓度成正比。接下来，我们尝试分析灌注液中溶解的挥发性麻醉剂甲氧氟烷如何影响 TPA 对 NMDA 诱导电流的增强，但我们无法收集足够的数据。