血液幹細胞および白血病細胞の分化増殖におけるレチノイン酸レセプターの役割

视黄酸受体在造血干细胞和白血病细胞分化增殖中的作用

• 批准号: 06770853
• 负责人: 中島 秀明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770853/
• 关键词: レチノイン酸; レチノイン酸レセプター; 血液幹細胞; 細胞分化; アンチセンス

本年度は、アンチセンスDNAを導入する予備実験として、RARα,RXRα,PML遺伝子に対するアンチセンスオリゴDNAを用いた転写阻害実験を行った。RARα,RXRα,PML各遺伝子の読みとり開始配列を含むアンチセンスオリゴDNA(AS-DNA)を、DNA合成機を用いて合成した。正常人骨髄単核球からAIS Microcellecterを用いてCD34陽性細胞を分離し、AS-DNA-20μM存在下で8時間培養した。これをメチルセルロース半固形培地にまき、G-CSF,IL-3,erythropoietin,存在下でのコロニー形成を検討した。RXRα,PML遺伝子に対するAS-DNAはコロニー形成に影響を与えなかったが、RARα遺伝子に対するAS-DNAはコロニー形成を著明に抑制した。コントロールとしてRARα遺伝子に対するセンスオリゴDNAを用いて同様の実験を行ったが、コロニー形成は抑制されなかった。現在、実験の追試を行うとともに、AS-DNAの濃度を変化させることによりコロニー形成の抑制が濃度依存的であるか否かを確認する予定である。RARα遺伝子の個体発生における役割については、2つのグループがRARα gene targeting mouseを作成し、解析している。これらのマウスでは個体発生はほぼ正常であり、造血系にも異常は見られなかった。このことは、RARα遺伝子は必ずしも個体発生や生体機能の維持に必須ではなく、他のRAR遺伝子(RARβ,RARγ)がその機能を代償しうる可能性を示している。上記の結果はこれらの事実と相反しているが、上記の実験で用いたAS-DNAの塩基配列がRARα特異的ではなく、造血に必須な未知の遺伝子の発現を抑制している可能性もあり、追試の結果が待たれる。

今年，作为引入反义DNA的初步实验，我们使用反义寡DNA针对RARα、RXRα和PML基因进行了转录抑制实验。使用DNA合成仪合成含有RARα、RXRα和PML基因的读取起始序列的反义寡DNA（AS-DNA）。使用 AIS Microcellecter 从正常人骨髓单核细胞中分离 CD34 阳性细胞，并在 AS-DNA-20 μM 存在下培养 8 小时。将其铺展在甲基纤维素半固体培养基上，并检查在G-CSF、IL-3和促红细胞生成素存在下的集落形成。针对RXRα和PML基因的AS-DNA对集落形成没有影响，但是针对RARα基因的AS-DNA显着抑制集落形成。使用 RARα 基因的有义寡 DNA 作为对照进行了类似的实验，但集落形成并未受到抑制。目前，我们计划进行后续实验，通过改变AS-DNA的浓度来确认集落形成的抑制是否具有浓度依赖性。关于 RARα 基因在个体发育中的作用，两个研究小组已经创建并分析了 RARα 基因靶向小鼠。这些小鼠的个体发育基本正常，造血系统未见异常。这表明RARα基因对于个体发育和生物功能的维持不一定是必需的，其他RAR基因（RARβ、RARγ）可能补偿其功能。尽管上述结果与这些事实相矛盾，但上述实验中使用的AS-DNA的碱基序列可能不是RARα特异性的，并且抑制了造血必需的未知基因的表达是的，补充检查的结果是。等待着。