副腎腫瘍におけるG蛋白およびAnoiotensinII受容体異常の検討

肾上腺肿瘤中 G 蛋白和血管紧张素 II 受体异常的检查

基本信息

批准号：
06770813
负责人：
柴田洋孝
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

副腎でのステロイド産生とくにアルドステロン産生にはアンジオテンシンII(AII)が重要な役割を果たしていいることがよく知られている.AIIは細胞膜表面にある7回膜貫通型の受容体を介してG蛋白質に情報を伝えさらにはカルシウム動員を行ないアルドステロン合成酵素に作用する.したがって,この受容体の動態およびG蛋白質の変化を検討することによりAIIのアルドステロン合成における役割をより一層明確に出来る.今回行なった実験では,副腎腫瘍(原発性アルドステロン症,クッシング症候群)および腎癌患者より得られた副腎を用いて,AII受容体をmRNAレベルでnorthern Blot解析を行なった.その結果,原発性スルドステロン症患者の副腎ではAII受容体mRNAはほぼ非腫瘍部分と差異がなく,また,クッシング症候群ではAII受容体mRNAは著しく低下していた.このことはアルドステロン症においてはAIIの反応が比較的血漿AIIが低下しているにも関わらず保持されていることと一致している.一方,クッシング症候群では低下していたことは,従来,ラットの血管平滑筋細胞を用いた実験での,AII受容体はむしろ亢進している結果と比較すると組織毎にその制御が異なっている可能性が示唆された.G蛋白質遺伝子においては,副腎組織より抽出したgenomic DNAを用いてGsα蛋白のコドン201,227を含む領域およびGiα蛋白のコドン179および205を含む領域を増幅するプライマーを作成してPCRを行ない,塩基配列の決定を行なった.いずれの副腎腫瘍でもPCRにより正常と同じ長さのPCR産生物を生じた.これらの塩基配列を解析したところ,明らかな点突然変異は認めなかった.以上の実験結果から,AIIの副腎でのステロイド産生に及ぼす影響は主として受容体レベルで決定されていることが明らかになった.

众所周知，血管紧张素 II (AII) 在肾上腺中类固醇的产生，尤其是醛固酮的产生中发挥着重要作用。此外，它还动员钙并作用于醛固酮合酶。通过检查该受体的动态和G蛋白的变化，我们可以进一步阐明AII在醛固酮合成中的作用。使用从北方获得的肾上腺在mRNA水平上检测到AII受体。印迹分析结果显示，原发性醛固酮增多症患者肾上腺中的AII受体mRNA与非肿瘤区域几乎相同，库欣综合征中AII受体mRNA显着降低。尽管血浆 AII 相对较低，但仍能维持。另一方面，库欣综合征的减少与之前使用大鼠血管平滑肌细胞的实验一致，其中AII受体相当上调，这表明G蛋白基因的调节可能因组织而异。使用DNA制作引物，扩增Gsα蛋白的密码子201和227的区域以及Giα蛋白的密码子179和205的区域，通过PCR确定碱基序列，与正常相同。产生相同长度的PCR产物时，没有发现明显的点突变，从以上实验结果可以看出，AII对肾上腺中类固醇产生的影响主要是由于受体。这是由水平决定的。