アクチン類以タンパク質、アクチン2の機能解析

肌动蛋白型蛋白肌动蛋白 2 的功能分析

• 批准号: 05857017
• 负责人: 田中 智之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857017/
• 关键词: アクチン2; アクチン類以タンパク質; プロテインキナーゼC

actin2は、我々の研究グループが高等有核生物で初めて発見し遺伝子クローニングを行ったウシのactin類以蛋白質である。actin2の機能解析を行うために、まず、ウシactin2のcDNAとGST遺伝子を融合させ、大腸菌で大量発現させ、グルタチオンセファロースを使い精製した.この精製されたGST-actin2融合蛋白質を材料として以下の実験が進行している.1.融合蛋白質をウサギに注射し,actin2に対するポリクローナル抗体を作製してすいる.この抗体を用いてactin2の細胞内分布を調べる予定である.2.actin分子と同様にactin2を結合するか,GST-actin2を用いて検討している.3.actin2内のプロテインキナーゼCによるリン酸化コンセンサスが,実際にリン酸化されるかどうか,精製プロテインキナーゼCをGST-actin2とインキョベートして検討している.4.actinモノマーがアクチンアィラメントを形成する際にGST-actin2が,アクチンフィラメントの一部として取り込まれるかを検討している.次ぎに,actin2のcDNAを発現ベクターに組み込んでNIH3T3に導入し,actin2をstableに発現するクローンを選択中である.これを用いて,actin2の強発現による細胞の形態変発現ならびに,TPA刺激によりactin2のリン酸化を検討予定である.

Actin2是一种牛肌动蛋白，我们的研究组首先在较高的核碱和克隆基因中发现。为了对Actin2进行功能分析，首先融合了牛Actin2和GST基因的cDNA，并在大肠杆菌中表达该基因，并使用谷胱甘肽Sepharose纯化。使用此纯化的GST-Actin2融合蛋白作为材料进行以下实验。 1。将融合蛋白注入兔子中，以产生抗actin2的多克隆抗体。该抗体计划用于检查肌动蛋白2的细胞分布。 2. actin2必定会以与肌动蛋白分子相同或正在研究GST-ACTIN2的方式。 3。磷酸蛋白激酶C在Actin2中引起的磷酸酶C蛋白的演化的共识实际上是磷酸化的，并且正在通过与GST-ACTIN2.4接种纯化的蛋白激酶C来研究。当肌动蛋白单体形成肌动蛋白分析物时，正在研究是否将GST-ACTIN2纳入肌动蛋白丝的一部分。接下来，将Actin2的cDNA掺入表达载体并引入NIH3T3中，并且正在选择表达Actin2稳定的克隆。使用此过程，我们将研究细胞的形态表达，因为肌动蛋白2的强表达和通过TPA刺激对肌动蛋白2的磷酸化。