ヌクレオソームポジショニングと転写調節機構

核小体定位和转录调控机制

• 批准号: 05780510
• 负责人: 清水 光弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780510/
• 关键词: 転写制御; クロマチン; ヌクレオソーム; RME1蛋白質; 亜鉛フィンガー; 減数分裂; S.cerevisiae

減数分裂は全ての真核生物に共通した生命現象であり、細胞分化を理解するうえで重要な過程である。酵母Saccharomyces cerevisiaeの減数分裂と胞子形成は、遺伝子群のカスケードと環境因子によって制御されている。IME1(Inducer of meiosis)遺伝子産物は、S.cerevisiae二倍体が減数分裂を開始するときに、特異的に発現する正の転写因子である。このIME1遺伝子の転写は、3つの亜鉛フィンガーを持つRME1(Repressor of meiosis)蛋白質によって抑制され、その結果として減数分裂開始が阻害される。しかし、この転写調節機構は分子レベルではほとんど分かっていない。本研究では、RME1蛋白質によるIME1遺伝子の転写抑制機構を明らかにすることを目的とし、酵母ゲノム中でクロマチン構造をとっているIME1遺伝子上流におけるRME1蛋白質の結合部位を解析した。まず、GAL1プロモーターにRME1をつないで誘導発現できるstrainsを作成した。次に、これらのintactな酵母細胞を用いて、UV-photo(254nm)またはジメチル硫酸によるフットプリントを多サイクルプライマー伸長法で解析した。その結果、RME1蛋白質は、IME1遺伝子上流-2037〜-2028にあるCCTCAAGAAGと-1955〜-1947にあるCCTCAAAAGの2つの部位に独立に結合することが明らかになった。さらに、結合部位に点変異を導入してDNA-蛋白質相互作用を解析し、既にX線解析で明らかにされたCys_2-His_2タイプの亜鉛フィンガーの結合様式と比較、検討した(投稿論文準備中)。現在、RME1結合部位近傍のヌクレオソームのポジションを解析しており、転写調節機構におけるクロマチン構造の役割を調べている。

减少是所有真核生物共有的生命现象，并且是理解细胞分化的重要过程。酿酒酵母的酵母糖疗法的减少和描绘形成受遗传组级联和环境因素的控制。 IME1（减数分裂的诱导剂）基因产物是阳性转录因子，当Cerevisiae双体开始降低时，这些转录因子是特异性表达的。该IME1基因的转移被带有三个锌指的RME1（减数分裂）蛋白的抑制剂抑制，这受到降低的开始抑制。但是，这种转移控制机制在分子水平上几乎不知道。在这项研究中，分析了RME1蛋白阐明IME1基因转移机制的目的，分析了上游IME1基因中RME1蛋白的连接位点，该基因在酵母基因组中具有染色质结构。首先，我创建了可以通过将RME1连接到GAL1启动子来引起的菌株。接下来，使用这些完整的酵母细胞，通过多周期引物扩展方法分析了用UV-Photo（254 nm）或硫酸二甲基硫酸二甲基硫酸盐的足迹。结果，据揭示了RME1蛋白在上游的IME1基因 - 2028年的IME1基因中独立结合了CCTCAAGAAG的两个部分和-1955 TO-1947。此外，将DNA蛋白相互作用分析到与联合部位的功能障碍，并且X射线分析已经揭示了CYS_2-HIS_2型锌指结合样式，并检查了（以准备发布纸张）。当前，我们正在分析核小体在RME1连接位点附近的位置，并且正在研究染色质结构在转移控制机理中的作用。