アルツハイマー型痴呆に於けるAPP遺伝子変異-地域悉皆調査に基づく発生頻度の検討

阿尔茨海默病痴呆中的APP基因突变——基于区域综合调查的发病率检查

基本信息

批准号：
05770423
负责人：
足立芳樹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1991年,Goateらはアミロイド前駆体蛋白(APP)遺伝子エクソン17上のコドン717バリンがイソロイシンに変異している家族性アルツハイマー病(FAD)家系を報告した。その後,世界で約10家系の同突然変異を有するFAD家系が報告されたが,その中で日本人家系は5家系と多く,日本人におけるこの変異が多い可能性がある。同変異の日本人に於ける頻度を明らかにすることを目的とした。1990年,我々は鳥取県大山町住民7,749人に対し,地域悉皆調査を行い,神経内科医の訪問診察により41人のアルツハイマー型痴呆を認めた。この内,本人および家族のインフォームドコンセントが得られ,採血が可能であった30人を対象とした。予めヘパリン0.5mlを入れたシリンジにて末梢血液を20ml採血した。フェノール・クロロフォルム抽出によりゲノムDNAを精製した。APPエクソン17を鋏むようしてPCR法に用いるプライマー1(5'-CCTCATCCAAATGTCCCCTG-3'),プライマー2(5'-CTTGGAAACATGCAGTCAAG-3')及び直接塩基配列決定法に用いるブライマ-3(5'-CAAGGTGTTCTTTGCAGAAG-3')を作成した。1本鎖DNAを得るためは非対称性PCRを行った。サーマルコントローラーを用いて30サイクル反応をおこなった。PCR産生物は,クロロフォルム抽出をおこない,5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて確認した。プライマー3を[gamma-^<32>P]ATPにてラベルし,PCR産生物のAPPエクソン17塩基配列をジデオキシ法直接塩基配列決定法により調べた。電気泳動ゲルには8%ポリアクリルアミドゲル(50%尿素)を用いた。地域悉皆調査により認められたアルツハイマー病有病者41人のうち採血が可能であった30人のAPPエクソン17の塩基配列はいずれも異常を認めなかった。日本人に於てもAPPエクソン17遺伝子異常の頻度は非常に多いとは言えないと考えられた。

1991年，Goate等人。报道了一个家族性阿尔茨海默氏病（FAD）家族，其中淀粉样蛋白（APP）基因17上的密码子717 Valine突变为异亮氨酸。后来，在全球范围内已经报道了大约10个具有相同突变的FAD家庭，其中有许多日本家庭，并且这种突变在日本人中可能更为普遍。目的是阐明日本人相同突变的频率。 1990年，我们对Oyama Town，Tottori县的7,749名居民进行了调查，并在拜访神经科医生后观察到了41名患有阿尔茨海默氏症型痴呆症的人。其中，有30名从个人及其家人获得知情同意并能够抽血的人是针对性的。先前使用含有0.5 mL肝素的注射器收集了20 mL外周血。通过苯酚 - 氯仿提取纯化基因组DNA。引物1（5'-CCTCCAAATGTCCCCTG-3'），引物2（5'-CTTGGAAACATGCAGTCAAG-3'）用于PCR，而Brima-3（5'-caaggtgtttttttgcagaag-3'）用于直接在序列中使用。进行非对称PCR以获得单链DNA。使用热控制器进行30周期反应。氯仿提取后，通过5％聚丙烯酰胺凝胶的电泳证实了PCR产物。底漆3用[伽马 - ^<32> p]标记，并通过Dideoxy Direct Direct Base测序方法检查了PCR产物的App Exon 17碱基序列。电泳凝胶为8％聚丙烯酰胺凝胶（50％尿素）。在被诊断出患有整个地区的41例阿尔茨海默氏病的患者中，在30个应用外显子17序列中未发现异常，能够收集。人们认为，在日本人中，APP外显子17基因异常的频率不是很常见。