免疫細胞における低分子量GTP結合蛋白質の機能

低分子量 GTP 结合蛋白在免疫细胞中的功能

• 批准号: 05770224
• 负责人: 幸田 敏明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770224/
• 关键词: 低分子量G蛋白質; リンパ球; マクロファージ; 細胞内小胞輸送

1.ヒトT細胞株Jurkatから得たcDNAクローンS10について、他の低分子量GTP結合蛋白質とアミノ酸配列を比較した結果、細胞内小胞輸送に関与するrabグループに属する可能性が高いことを明らかにした。2.S10の種々のヒト培養細胞における発現を調べた結果、T及びBリンパ球と一部の単球系細胞株においてのみその発現が認められ、免疫系の細胞(の一部)に特異的に発現する遺伝子であることを明らかにした。3.S10のcDNAを大腸菌の発現ベクターに組み込み、マルトース結合蛋白あるいはグルタチオンSトランスフェラーゼとの融合蛋白として、大量にS10蛋白質を合成し、分離精製した。この蛋白をウサギに免疫して抗血清を得て、さらにS10に特異的な抗体を精製した。この抗体は、ヒトのS10は認識できたが、マウスのS10は認識できなかった。4.S10蛋白質が、細胞内の膜画分及び細胞質画分に多く存在し、核には少ないことを明らかにした。5.S10のcDNAに恒常的活性型及び優性抑制型の突然変異を導入し、それぞれの変異S10蛋白質を発現するプラスミドを構築した。IL2プロモーターにCAT遺伝子をつないだプラスミドをレポーターとしてJurkat細胞にコトランスフェクト実験を行い、これらの変異S10蛋白質のT細胞活性化に及ぼす影響をIL2プロモーターの活性化を指標として調べた結果、T細胞活性化には影響しないことが明らかとなった。

1。从人类T细胞库存的jurkat获得的cDNA克隆S10与其他低分子量GTP结合蛋白和氨基酸序列进行了比较，表明它可能属于参与细胞内发声的Rab基团。 2。由于检查了S10中各种人培养细胞的表达，仅在T和B淋巴细胞和某些单个膨胀细胞中识别出表达，并针对免疫系统细胞（一部分）那是一个表达的基因。 3。将S10 cDNA掺入大肠杆菌的载体中，并合成了大量的S10蛋白，并分离并精制成融合蛋白，并用Martose结合蛋白或谷胱甘肽转移酶进行了融合。该蛋白是对兔子的免疫力，获得了抗粉刺，并进一步完善了S10的抗体。抗体被人类S10识别，但无法识别小鼠S10。 4。S10蛋白已显示出在细胞中的薄膜绘画和磨牙物中很常见，并且在细胞核中很小。 5。在S10的cDNA中，引入了恒定活性类型和显性抑制类型突变，并构建了表达每个突变体S10蛋白的质粒。 t细胞作为IL2启动子的指标作为IL2启动子的指标，作为IL2启动子的指标，对与IL2启动子相关的质粒作为记者作为记者的质粒对Jurkat细胞的影响。不影响激活。