遺伝子再集合体を用いた血清型1、2、4型ヒトロタウイルスのマウス感染モデルの確立

利用基因重配建立人轮状病毒血清型1、2和4的小鼠感染模型

• 批准号: 05770214
• 负责人: 小林 宣道
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770214/
• 关键词: ヒトロタウイルス; 血清型; 遺伝子再集合体; 単クロン抗体; VP7; VP4

本研究はロタウイルスワクチンの開発と評価に必要な、血清型1、2、4型ウイルスによる動物感染モデルの確立を目的として、マウスへの感染性を有するサルロタウイルスSA11株と感染性のない血清型1、2、4、9型ヒトロタウイルス(HRV)の間で遺伝子再集合体(reassortant)を多数作成し、その遺伝学的特徴を解析した。1.SA11株と血清型1(KU株)、血清型2(DS-1株,HN126株),血清型4(Hochi株),尾よび血清型9(WI61株)HRVをそれぞれMA-104細胞に混合感染させた後、培養液を血清型3特異的中和単クロン抗体とHRV株とのみ反応する抗VP4中和単クロン抗体の存在下で培養を3回繰り返した。抗体による選択を経た培養液を用いてプラークをランダムに40クローンづつ分離、培養し、それぞれのクローンにおける11本の分節RNAの由来と抗原性を解析した。2.得られた計200のウイルスクローンはいずれもVP7がHRVに由来し、VP4がSA11に由来する抗原モザイク型遺伝子再集合体であることが確認された。また、SA11とHRV KU株,Hochi株,WI61株間での遺伝子再集合体では5種類のgenotypeが見られたのに対し、DS-1株,HN126株との間ではそれぞれ17,11種類のgenotypeが検出され、SA11と混合感染させたHRVの種類により、分節RNAの親株からの選択の様式には違いがあることが示唆された。得られた遺伝子再集合体ではVP7遺伝子以外の多くのRNA分節はSA11に由来する傾向が見られたが、gene5のみはHRVからの選択率が他に比して有為に高かった。3.得られた遺伝子再集合体のうち、SA11/KU-R1,SA11/DS1-R1,SA11/Hochi-R1はVP7遺伝子のみがそれぞれ血清型1,2,4型HRVに由来し、他の遺伝子はすべてSA11由来の単一遺伝子reassortantであることが判明した。これらの株はHRVの異なる血清型を有しつつも親株SA11と同様にマウスへの感染性を持つ可能性が高い。これらの遺伝子再集合体のマウスでの感染性、下痢起因性については現在詳細な検討を進めている。

This study aimed to establish a model for the animal infection with serotypes 1, 2, and 4 viruses, which are necessary for the development and evaluation of rotavirus vaccines, and many gene reassemblies were created between sarrotavirus SA11 strains that are infectious to mice and non-infectious human rotavirus type 1, 2, 4, and 9 human rotavirus (HRV) and analyzed their genetic characteristics. 1。在MA-104之后，用SA11和血清型1（KU），血清型2（DS-1，HN126菌株），菌株血清型4（HOCHI）以及尾部和血清型9（WI61）HRV分别重复培养在抗Anib中的三次中，抗Antibles Antipe ancote Antipe and Inoct and Inoct and pep4，1。 3特异性中和单克隆抗体和与HRV菌株反应的抗VP4中和单克抗体。使用抗体选择的培养基在40个克隆中随机分离并在40个克隆中培养斑块，并分析了每个克隆中11个分段RNA的起源和抗原性。 2。已经证实，VP7在所有200个病毒克隆中源自HRV，并且VP4是源自SA11的抗原镶嵌基因基因重新组装。此外，在SA11和HRV KU菌株，Hochi菌株和Wi61菌株之间的基因组合中发现了五种类型的基因型，而DS-1和HN126菌株之间检测到17和11种基因型的基因型，这表明来自sav comders sav的sextal rna选择不同的是save sa的不同模式。在由此产生的基因重新组装中，除VP7基因以外的许多RNA段倾向于源自SA11，但仅基因5的HRV选择性明显高于其他基因。 3。在所得的基因重新组合中，仅SA11/KU-R1，SA11/DS1-R1，SA11/HOCHI-R1的VP7基因分别源自血清型1、2和4 HRV，所有其他基因是从SA11衍生的单基因。这些菌株具有不同的HRV血清型，但可能对小鼠具有感染性，类似于父菌株SA11。目前，我们正在详细研究这些基因在小鼠中的感染性和感染性以及腹泻的感染性。