遺伝子再集合体を用いた血清型1、2、4型ヒトロタウイルスのマウス感染モデルの確立

利用基因重配建立人轮状病毒血清型1、2和4的小鼠感染模型

• 批准号: 05770214
• 负责人: 小林 宣道
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770214/
• 关键词: ヒトロタウイルス; 血清型; 遺伝子再集合体; 単クロン抗体; VP7; VP4

本研究はロタウイルスワクチンの開発と評価に必要な、血清型1、2、4型ウイルスによる動物感染モデルの確立を目的として、マウスへの感染性を有するサルロタウイルスSA11株と感染性のない血清型1、2、4、9型ヒトロタウイルス(HRV)の間で遺伝子再集合体(reassortant)を多数作成し、その遺伝学的特徴を解析した。1.SA11株と血清型1(KU株)、血清型2(DS-1株,HN126株),血清型4(Hochi株),尾よび血清型9(WI61株)HRVをそれぞれMA-104細胞に混合感染させた後、培養液を血清型3特異的中和単クロン抗体とHRV株とのみ反応する抗VP4中和単クロン抗体の存在下で培養を3回繰り返した。抗体による選択を経た培養液を用いてプラークをランダムに40クローンづつ分離、培養し、それぞれのクローンにおける11本の分節RNAの由来と抗原性を解析した。2.得られた計200のウイルスクローンはいずれもVP7がHRVに由来し、VP4がSA11に由来する抗原モザイク型遺伝子再集合体であることが確認された。また、SA11とHRV KU株,Hochi株,WI61株間での遺伝子再集合体では5種類のgenotypeが見られたのに対し、DS-1株,HN126株との間ではそれぞれ17,11種類のgenotypeが検出され、SA11と混合感染させたHRVの種類により、分節RNAの親株からの選択の様式には違いがあることが示唆された。得られた遺伝子再集合体ではVP7遺伝子以外の多くのRNA分節はSA11に由来する傾向が見られたが、gene5のみはHRVからの選択率が他に比して有為に高かった。3.得られた遺伝子再集合体のうち、SA11/KU-R1,SA11/DS1-R1,SA11/Hochi-R1はVP7遺伝子のみがそれぞれ血清型1,2,4型HRVに由来し、他の遺伝子はすべてSA11由来の単一遺伝子reassortantであることが判明した。これらの株はHRVの異なる血清型を有しつつも親株SA11と同様にマウスへの感染性を持つ可能性が高い。これらの遺伝子再集合体のマウスでの感染性、下痢起因性については現在詳細な検討を進めている。

本研究旨在使用血清型 1、2 和 4 病毒建立动物感染模型，这对于开发和评估轮状病毒疫苗是必要的。我们在人类轮状病毒 (HRV) 血清型 1、2、4 和 9 中创建了许多基因重配体。 ，并分析其遗传特征。 1. SA11株、血清型1（KU株）、血清型2（DS-1株、HN126株）、血清型4（Hochi株）、Oyo和血清型9（WI61株）分别在MA-104细胞中的HRV。 -感染细胞后，将培养液在血清型3特异性中和单克隆抗体和仅与HRV株反应的抗VP4中和单克隆抗体存在下培养3次。使用抗体选择的培养基随机分离并培养40个克隆中的噬菌斑，并分析每个克隆中11个片段RNA的来源和抗原性。 2.证实获得的200个病毒克隆全部是抗原嵌合基因重配体，其中VP7源自HRV，VP4源自SA11。此外，在SA11和HRV KU株、Hochi株和WI61株之间的基因重配中观察到5种基因型，而在DS-1株和HN126株之间分别观察到17种和11种基因型。这表明，根据与 SA11 共感染的 HRV 类型，从亲本菌株中选择分段 RNA 的模式存在差异。在由此产生的基因重配中，除VP7基因外的许多RNA片段往往源自SA11，但只有基因5的HRV选择率明显高于其他基因。 3.获得的基因重配体中，SA11/KU-R1、SA11/DS1-R1和SA11/Hochi-R1分别仅具有源自HRV血清型1、2和4的VP7基因；来自 SA11 的单基因重配。尽管这些毒株具有不同的 HRV 血清型，但它们很可能与亲本毒株 SA11 对小鼠具有相同的感染性。我们目前正在对这些基因重配体在小鼠中的感染性和引起腹泻的特性进行详细研究。