高等植物細胞膜に局在するGタンパク質複合体に関する生化学的研究

高等植物细胞膜 G 蛋白复合物的生化研究

• 批准号: 05856066
• 负责人: 岩崎 行玄
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fukui Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05856066/
• 关键词: G蛋白質; シグナル情報伝達; 細胞膜; 遺伝子解析; 遺伝子発現調節

G-蛋白質サブユニットのcDNAクローニングおよび塩基配列の解析(1)イネ緑葉より単離したPoly(A+)RNAより、クローニングベクターlambdaZAPを用いて、cDNAライブラリーを作成した。(ライブラリーサイズ;1×10^6)(2)alphaサブユニットに対するcDNAクローニングalphaサブユニットに対するcDNAクローニングは、アラビドプシスのalphaサブユニットのcDNA断片をプローブとし、上記イネライブラリーよりスクリーニングした。この結果、全長炊く1.6KbpのcDNAを含むクローンを得た。部分的な塩基配列を解析したところ、アラビドプシスと高い相同性領域(40アミノ酸中、36個)が確認された。現在、全塩基配列を決定中である。(3)betaサブユニットに対するcDNAクローニングbetaサブユニットに対するcDNAクローニングは、クラミドモナス、鶏、人間等のbetaサブユニットに高い相同性を示す領域を含むcDNA断片をプローブとし、上記イネライブラリーよりスクリーニングした。この結果、全長約1.2KbpのcDNAを含むクローンを得た。部分的な塩基配列を解析したところ、クラミドモナスと高い相同性領域(30アミノ酸中、25個)が確認された。現在、全塩基配列を決定中である。(4)Northern Hybridazationalphaサブユニットに対する転写産物は、Northern hybridazationにより解析した。緑葉に、約1.6Kbの転写産物を検出した。暗所下で生育した茎、葉には検出されなかった。betaサブユニットに関しては、現在、解析中である。

G蛋白亚基的cDNA克隆和碱基序列分析(1)使用克隆载体lambdaZAP从水稻绿叶中分离的Poly(A+)RNA构建cDNA文库。 (文库大小：1×10^6) (2)α亚基的cDNA克隆 通过使用拟南芥α亚基的cDNA片段作为探针筛选上述水稻文库，进行α亚基的cDNA克隆。结果，获得了含有1.6Kbp全长cDNA的克隆。部分碱基序列分析揭示了与拟南芥具有高度同源性的区域（40 个氨基酸中的 36 个）。目前正在确定整个碱基序列。 (3)β亚基的cDNA克隆 对于β亚基的cDNA克隆，使用含有与衣藻、鸡、人等的β亚基表现出高度同源性的区域的cDNA片段作为探针，筛选上述水稻文库。结果，获得含有全长约1.2Kbp的cDNA的克隆。部分碱基序列分析揭示了与衣藻具有高度同源性的区域（30 个氨基酸中的 25 个）。目前正在确定整个碱基序列。 (4)通过Northern杂交分析Northern杂交α亚基的转录本。在绿叶中检测到大约 1.6 Kb 的转录本。在黑暗中生长的茎和叶中未检测到它。目前正在分析β亚基。