Study of heterotrimeric G protein regulating organ size in rice

异源三聚体G蛋白调节水稻器官大小的研究

基本信息

批准号：
21K05528
负责人：
岩崎行玄
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Fukui Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

花組織に着目し、イネ3量体Ｇタンパク質複合体を構成する7種類のコアサブユニットを定量した。定量結果は、WBで得られたngを、分子量で除することにより、molで表記した。植物材料は、T65（野生型）、GS3（Gγ3ヌル変異体）、Mi（Gγ3ΔCis変異体）、およびd1（Gαヌル変異体）を用いた。組織は、花に着目した。上記4種類のイネより、おのおの粗ミクロソーム画分を調製後、水性2層分配法により細胞膜画分を調製した。実験スケールは、将来、免疫沈降実験を視野に入れ、毎回、細胞膜300μgタンパク質を出発とした。Gαサブユニットは、T65、GS3、Mi、それぞれ、17、15、15 pmolであった。Gβサブユニットは、T65、GS3、Mi、d1の細胞膜300μgタンパク質当たり、それぞれ、96、83、83、64 pmolであった。Gγ1サブユニットは、T65、GS3、Mi、d1で、8、9、7、14 pmolであった。Gγ2サブユニットは、T65、GS3、Mi、d1で、１、１、１、１ pmolであった。Gγ3サブユニットは、T65、GS3、Mi、d1で、７、0（ヌル）、32、7 pmolであった。Gγ4サブユニットとGγ5サブユニットは、検出限界以下であった。この定量実験により、下記の点が明らかになった。Gβサブユニットは、T65、GS3、Miにおいて、Gαサブユニットより、およそ5倍多く存在する。次に、Gγ1～Gγ5の総和が、T65、GS3、Mi、d1で、およそ、17、10、40、21 pmolになるので、この値をGαサブユニット量と比べてみると、野生型はGα(1)：Gβ(1)：Gγs(1)の3量体、GS3はβγが少ないことによる単独のGαの存在、Miは過剰のβγによるGαの不活性化が推察された。

为了集中在花组织上，量化了构成稻米三聚体G蛋白复合物的七个核心亚基。定量结果通过将WB中的NG除以分子量来表示为mol。植物材料为T65（野生型），GS3（Gγ3空突变体），MI（Gγ3ΔCIS突变体）和D1（GαNull突变体）。该组织专注于鲜花。在从上述四种水稻中制备了粗粒体的粗粒小部分后，然后通过水性两层分配方法制备每个粗粒体分数。实验量表是每次从300μg细胞膜蛋白开始，将来考虑了免疫沉淀实验。 Gα亚基分别为17、15和15 PMOL，T65，GS3和MI。 Gβ亚基分别为T65，GS3，MI和D1的每300μg细胞膜蛋白的96、83、83和64 pmol。 Gγ1亚基为T65，GS3，MI，D1和8、9、7、14 pmol。 Gγ2亚基为T65，GS3，MI，D1，1，1，1，1，1，1，1 pmol。 Gγ3亚基为T65，GS3，MI，D1，7，0（Null），32，7 Pmol。 Gγ4和Gγ5亚基低于检测极限。该定量实验揭示了以下几点：在T65，GS3和MI中，Gβ亚基的存在大约是Gα亚基的五倍。 Next, the sum of Gγ1 to Gγ5 is approximately 17, 10, 40, and 21 pmol for T65, GS3, Mi, and d1, so when comparing this value with the amount of Gα subunit, it was inferred that the wild type is the trimer of Gα(1):Gβ(1):Gγs(1), GS3 is the presence of single Gα due to a small βγ, and Mi is the inactivation of gα通过过量的βγ。